Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
сделать стартовой добавить в избранное
Кефирный гриб на сайте www.za4et.net.ru

Биология Биология

Методы переноса генетического материала в клетки млекопитающих

Забавная пачка денег "100 долларов".
Купюры в пачке выглядят совсем как настоящие, к тому же и банковской лентой перехвачены... Но вглядитесь внимательней, и Вы увидите
60 руб
Раздел: Прочее
Фонарь желаний бумажный, оранжевый.
В комплекте: фонарик, горелка. Оформление упаковки - 100% полностью на русском языке. Форма купола "перевёрнутая груша" как у
87 руб
Раздел: Небесные фонарики
Наклейки для поощрения "Смайлики 2".
Набор для поощрения на самоклеящейся бумаге. Формат 95х160 мм.
19 руб
Раздел: Наклейки для оценивания, поощрения

Введение Все эксперименты по переносу генетического материала состоят из двух отдельных этапов: переноса ДНК от донора к реципиенту и отбора реципиентных клеток, которые включили генетический материал донора. Большинство соответствующих методов позволяют ввести чужеродный материал в одну клетку из тысячи, а то и десяти миллионов, поэтому для отбора нужны весьма эффективные средства. Именно эта стадия зачастую является лимитирующей в ходе эксперимента. Первые опыты по переносу генетического материала осуществляли с помощью слияния целых клеток. Такая техника нашла применение при изучении процессов дифференцировки и канцерогенеза, однако наиболее успешно ее использовали при картировании генов человека и получении моноклональных антител. Известно, что сформировавшийся при слиянии клеток грызуна и человека межвидовой гибрид спонтанно теряет человеческие хромосомы. Как правило, утрата хромосом происходит случайным образом, и это позволяет конструировать гибридные линии клеток, в которых содержатся разные хромосомы человека. Корреляция между присутствием конкретной хромосомы человека и экспрессией генетического маркера является основой для отнесения соответствующего гена к определенной группе сцепления. Из 1300 генов человека, картированных на сегодняшний день, примерно треть локализована на конкретных хромосомах с помощью методов генетики соматических клеток. Процесс утраты хромосом у внутривидовых гибридов происходит не так быстро, как у гибридов межвидовых. При слиянии клеток мышиной миеломы с клетками селезенки формируются стабильные линии гибридных клеток. Их характеризует иммортальность, унаследованная от миеломных клеток, и способность продуцировать антитела. Хромосомная нестабильность межвидовых гибридов, сложности при кариотипировании тетраплоидных внутривидовых гибридов ограничивали применение методов генетики соматических клеток для генетического анализа сложных фенотипов. Необходимо было научиться переносить отдельные хромосомы между соматическими клетками. Это удалось сделать с помощью мини-клеток. Несмотря на технические трудности, метод MMG с успехом использовали для создания гибридов и последующего картирования генов, для анализа процессов дифференцировки и развития опухоли. Такие эксперименты позволили с уверенностью говорить о существовании специфических ^ra s-действующих регуляторов, участвующих в формировании фенотипа дифференцированной клетки; кроме того, был подтвержден рецессивный характер гена опухоли Вильмса. Методы слияния целых клеток и MMG эффективны для хромосомной локализации гена, возможность более тонкого картирования этими методами ограничена, так как оно требует наличия хромосом с транслокациями и делециями. Для решения этой задачи разработаны два метода: перенос генов, опосредованный хромосомой, и перенос генов в процессе слияния облученной клетки-донора с необлученным реципиентом. Первый способ предполагает инкубацию очищенных митотических хромосом с клетками-реципиентами в присутствии фосфата кальция. При этом происходит встраивание фрагментов донорных хромосом в хромосомы клетки-реципиента.

Для идентификации гибридов, содержащих нужные фрагменты ДНК донора, применяют соответствующие методы селекции. К сожалению, встроенные фрагменты хромосом зачастую претерпевают реорганизацию, кроме того, есть достоверные данные о предпочтительном проникновении в клетку и последовательностей из центромерных областей. Эти недостатки не позволяют использовать CMG для картирования, хотя данный метод весьма эффективен для обогащения специфическими фрагментами хромосом – составной части стратегии клонирования, называемой «обратной генетикой». Госс и Харис впервые показали, что фрагменты Х-хромосомы человека, появляющиеся в его гамма-облученной клетке, можно сохранить при слиянии этой клетки с клеткой грызуна. Углубленный анализ метода IFG показал, что полученные фрагменты реорганизованы и для них характерна та же тенденция представлять центромерные области, что и при CMG . Геномную ДНК можно ввести, добавляя ее очищенный препарат к реципиентным клеткам. Эта процедура также очень важна для анализа функционирования генов в клетках млекопитающих. Разработаны три способа введения ДНК: преципитация с фосфатом кальция, с помощью ретровирусного вектора и микроинъекция. Вероятно, для каждого из них существует предельный размер фрагментов ДНК, которые переносятся без повреждения. Хотя эту гипотезу не подвергали тщательной проверке, скорее всего дело обстоит именно так. Фрагменты длиной более 100 тысяч пар оснований вряд ли можно перенести без потерь, если это вообще возможно. Метод DMG кроме функциональных исследований используют для случайного встраивания в геном селектируемых генов и для клонирования генов, при селекции которых необходима экспрессия. 1. Общие положения 1.1 Необходимые условия Условия культивирования клеток должны обеспечивать их максимальную жизнеспособность. Это особенно важно для клеток, используемых в эксперименте по переносу, поскольку данная процедура предполагает использование потенциально токсичных веществ, таких, например, как полиэтиленгликоль. Успех экспериментов по генетическому переносу во многом определяется эффективностью посева клеток-реципиентов. Следовательно, эффективность посева всех клеточных линий, которые будут использованы в качестве реципиентов, должна быть проверена в условиях, аналогичных экспериментальным. Линии, демонстрирующие эффективность посева менее 10%, не годятся на роль реципиента. Все манипуляции необходимо проводить в стерильных условиях и со стерильными реагентами. Растворы следует готовить только из реактивов, предназначенных для культивирования клеток, обязательно использовать для этого бидистиллированную воду. 1.2 Селекция Цель селекции – предоставление определенных преимуществ клеткам, необходимым экспериментатору. Существуют четыре группы методов селекции. 1.2.1 Биохимическая селекция, основанная на эндогенных генах Наиболее широко распространенный пример такого подхода – НАТ-селекция. В присутствии аминоптерина ингибируется синтез de ovo предшественников ДНК. Клетки, лишенные фермента тимидинкиназы, не могут утилизировать экзогенный тимидин и гибнут в присутствии аминоптерина.

Аналогично, клетки, лишенные гипоксантин-фосфорибозилтрансферазы, не могут усваивать гипоксантин и также нежизнеспособны в присутствии аминоптерина. Соматические гибриды, полученные при слиянии ТК-, НРКТ -кле-ток с клетками ТК , HPR -, могут оказаться одновременно ТК , HPR . Гибридные клетки с таким генотипом способны расти в присутствии аминоптерина, если гипоксантин и тимидин добавлены в среду. Распространен вариант НАТ-метода, когда один партнер по гибридизации не может размножаться i vi ro, а другой – является дефицитным по ТК или HPR . Для исследований в области генетики соматических клеток разработано большое количество систем комплементации. Многие из них основаны на использовании различных ауксотрофных и прототрофных клеточных линий хомячков. Этот подход требует создания подходящих мутантных клеток-реципиентов. Учитывая важность НАТ-селекции, мы предлагаем вниманию читателей руководство по приготовлению соответствующей среды. 1.2.2 Биохимическая селекция, основанная на экзогенных генах Этот подход избавляет нас от необходимости выделять специфический мутант, поскольку он подразумевает использование бактериальных генов, которые дают селективные преимущества при их экспрессии в клетках млекопитающих. Для этого конструируют плазмидные и ретровирусные векторы, в которых бактериальные гены сочетаются с промоторами, местами сплайсинга и сигналами полиаденилирования млекопитающих. Введение бактериальных генов в клетки млекопитающих с помощью трансфекции или инфекции приводит к их случайному распределению в геноме реципиента. В качестве примера бактериальных генов, способных обеспечивать селективные преимущества клеток млекопитающих, можно назвать ген Е. coli gp и генлео. Основной недостаток этого метода – случайное распределение сайтов интеграции; однако последние исследования позволяют надеяться, что с помощью гомологичной рекомбинации удастся осуществлять направленную интеграцию. 1.2.3 Антигены клеточной поверхности В роли селективного фактора могут выступать антитела. При этом мы получаем возможность выделять клетки с определенным набором антигенов клеточной поверхности. Применение антител лежит в основе ряда методов, среди них отбор клеток с помощью клеточного сортера, розеткообразование с эритроцитами, связанными антителами, избирательное прикрепление клеток к поверхности с иммобилизованными на ней антителами. Хотя эффективность селекции клеток с помощью антител недостаточно высока, тем не менее селекция с использованием антител применяется во всех методах переноса генов, описываемых здесь, за исключением MMG . 1.2.4 Активированные онкогены Мутировавшие протоонкогены, особенно члены семейства ras-генов, обеспечивают преимущества в росте клеток млекопитающих и, следовательно, могут быть использованы для селекции. 2. Слияние целых клеток 2.1 Введение Известно, что при смешивании клеток они могут спонтанно сливаться, однако событие это чрезвычайно редкое. Эффективность слияния может быть существенно увеличена с помощью специфических антигенов. Первоначально для этой цели использовали инактивированный вирус Сендай, однако биологическая неоднородность различных партий инактивированного вируса и громоздкость процедуры слияния, индуцированного вирусом, привели к широкому использованию химического индуктора–полиэтиленгликоля.

КОНЪЮГАТЫ (сцеплянки) класс зеленых водорослей, для которых характерен половой процесс конъюгация. Ок. 50 родов, 4–6 тыс. видов, в пресных водоемах, где часто образуют тину. Спирогира, мужоция и др. КОНЪЮГАЦИЯ (от лат. conjugatio — соединение) 1) половой процесс у некоторых водорослей, напр. конъюгат, при котором сливается содержимое двух внешне сходных вегетативных клеток. 2) Половой процесс у инфузорий, при котором происходит обмен частями ядерного аппарата и протоплазмы между конъюгирующими особями. 3) Способ переноса генетического материала от одной бактериальной клетки к другой. 4) Сближение гомологичных хромосом, при котором между ними может произойти обмен гомологичными участками. КОНЪЮНКТИВА (от позднелат. conjunctivus — соединительный) соединительнотканная прозрачная оболочка глаза; покрывает заднюю поверхность век и переднюю часть глаза до роговицы. КОНЪЮНКТИВИТ воспаление конъюнктивы. Основные причины: инфекция, химические и физические (напр., пыль) раздражения. Признаки: покраснение и резь в глазу, слизистые или слизистогнойные выделения, слезотечение, светобоязнь. КОНЪЮНКТУРА (ср. — век. лат. conjunctura от лат. conjungo — связываю, соединяю) 1) сложившаяся обстановка, создавшееся положение, временная ситуация в какой-либо области общественной жизни (напр., международная конъюнктура). 2) Конъюнктура экономическая — конкретные условия процесса воспроизводства на каждый данный момент

1. Оценка финансового состояния предприятия и основные способы его оздоровления

2. Основные способы производства и последовательность их смены в истории человеческого общества

3. Основные способы классификации налогов

4. Основные способы печати как база полиграфических технологий

5. Хромосомы - материальные носители генетической информации. Наследственность и изменчивость

6. Характеристика основных способов действия в специальной операции по пресечению захвата ВГО
7. Основные способы словообразования в современном английском языке
8. Вычислительные сети. Основные способы передачи данных

9. Основные формы первичной маркетинговой информации

10. Способы обработки экономической информации

11. Способы обработки экономической информации в анализе хозяйственной деятельности предприятия

12. Внешние устройства ПК. Функциональные возможности. Основные характеристики. Обмен информацией

13. Способы защиты информации

14. Единство вещества, энергии и информацииосновной принцип существования живой материи

15. Реконструкция и модернизация как способы восстановления основных средств

16. Основные генетические характеристики популяции

Помпа для воды "HotFrost", A6, механическая.
Цвет корпуса: синий/серый. Тип установки: на бутыль. Тип помпы: механический. Тип крана: кнопка на корпусе. Количество кранов: 1. Материал
357 руб
Раздел: Прочее
Набор для изготовления мягкой игрушки "Собачка".
Домашняя студия мягкой игрушки. Полностью готовые детали кроя и синтепоновый наполнитель. Разложите все детали кроя и определите их
422 руб
Раздел: Игрушки
Магнитный театр "Теремок".
Увлекательное театральное представление с любимыми героями русской народной сказки «Теремок» и вашим ребенком в роли главного режиссера.
308 руб
Раздел: Магнитный театр

17. Web-серверы, базы данных в Интернет, Поиск информации в Интернет, Основные системы и средства

18. Современные способы обработки информации

19. Способы кодирования информации и порядок преобразования десятичных чисел в двоичные и наоборот в информатике

20. Основные принципы и способы защиты населения от опасностей

21. Основные субклеточные структуры растительной клетки

22. Информация в бухгалтерской отчетности об основных средствах: ее оценка, содержание и порядок ее формирования
23. Основные концепции бухгалтерской информации
24. Способы совершения преступления в сфере компьютерной информации

25. Основные понятия безопасности информации

26. Поиск информации в Интернете по теме "Учет амортизации (износа) основных средств"

27. Способы защиты информации

28. Основные характеристики способов выхода на зарубежные рынки

29. Анализ способов защиты и хищения информации в счетчиках электрической энергии

30. Капитальные вложения, как способ воспроизводства основных средств

31. Основные экономико-статистические категории, способы их расчетов

32. Разработка основных разделов проекта производства работ

Блюдо для блинов "Спелая смородина", 24,5x28x3 см.
Блюдо для блинов. Размер: 24,5x28x3 см. Материал: фарфор.
619 руб
Раздел: Прочее
Игра логическая "IQ-Колечки".
Сможете ли вы найти недостающее звено? Расставьте все детали головоломки на игровом поле. Будь внимателен! Звеньев деталей 36, а свободных
680 руб
Раздел: Игры логические
Кепка "Zabivaka", детская, размер 52.
Этот обаятельный, улыбчивый символ Чемпионата мира по футболу ещё и сувенир в память о событии мирового масштаба на всю жизнь! Размер: 52.
471 руб
Раздел: Брелоки, магниты, сувениры

33. Основные звездные характеристики. Рождение звезд

34. Генетическая инженерия

35. Генетические алгоритмы

36. Дендритные клетки

37. Клетки иммунной сисемы. Иммунокомпетентные клетки

38. Основы молекулярной биологии клетки
39. Клетка, ткань
40. Генетика и генетическая информция

41. Клетка как архитектурное чудо

42. Строение и функции клетки

43. Химия наследственности. Нуклеиновые кислоты. ДНК. РНК. Репликация ДНК и передача наследственной информации

44. Разработка основных биотехнологических процессов производства и системы управления качеством липидных косметических препаратов (на примере тоников для проблемной кожи)

45. Основные принципы создания группировок войск для сражения, принятия решения командованием и организации управления

46. Поражающие факторы ядерного оружия и способы защиты от него

47. Способы защиты населения при радиоактивном и химическом заражении местности

48. Основные черты географии народного хозяйства Дальнего Востока

Ежедневник недатированный "Чемпионат мира по футболу 2018. Эмблема", синий, А5, 176 листов.
Ежедневник недатированный. Формат: А5. Количество листов: 176. Твердый переплет. Термотиснение. Ляссе.
519 руб
Раздел: Канцтовары, хобби
Кепка "Zabivaka", взрослая, размер 58.
Этот обаятельный, улыбчивый символ Чемпионата мира по футболу ещё и сувенир в память о событии мирового масштаба на всю жизнь! Размер: 58.
471 руб
Раздел: Брелоки, магниты, сувениры
Подгузники Huggies Elite Soft, (1), до 5 кг, 27 штук.
Подгузники Huggies Classic обеспечат надежную защиту вашего малыша. Детские подгузники стали еще удобнее. Благодаря дополнительному слою,
384 руб
Раздел: 0-5 кг

49. Основные направления научных исследований в России и за рубежом

50. Основные тенденции, перспективы развития современного мирового хозяйства

51. Объем и характеристики исходной информации для составления проектов разработки нефтяных и газовых месторождений (контрольная)

52. Государственный бюджет, как экономическая категория и основной финансовый план Украины

53. Основные задачи и сферы государственного регулирования в экономике

54. Основные направления деятельности федеральной службы налоговой полиции по выявлению и пресечению финансовых преступлений
55. Основные направления государственного регулирования финансовых отношений в РФ
56. Правоохранительную деятельность и основные задачи адвокатуры

57. Задачи сводки и основное ее содержание

58. Вещно-правовые способы защиты права собственности

59. Залог - как способ обеспечения исполнения обязательств

60. Гражданско-правовые способы защиты права собственности и ограниченных вещных прав

61. Ипотечное жилищное кредитование как способ улучшения жилищных условий

62. Основные направления внешней политики республики Беларусь

63. Формирование советской культуры: основные направления

64. Парламент Великобритании и его основные характеристики. Функции палат

Фоторамка "Poster black".
Рамка может располагаться как вертикально, так и горизонтально. Экран у рамки пластиковый. Для фотографий размером: 30х40см. Материал рамки: пластик.
332 руб
Раздел: Размер 30x40
Светильник "Плазма №5".
Размеры светильника: 22х11х11.5 см. Диаметр лампы: 11 см. Плазменный светильник в виде шара на подставке, при включении создаёт внутри
1191 руб
Раздел: Необычные светильники
Универсальная вкладка для дорожных горшков (голубой).
Вкладка для дорожных горшков подойдет для любого дорожного горшка, она хорошо ложится на сиденье, обеспечивая комфорт и удобство в
664 руб
Раздел: Прочие

65. Конституционные гарантии основных прав и свобод человека и гражданина в Российской Федерации

66. Конституция - основной закон государства

67. Основные права и свободы Российских граждан

68. Конституция – основной закон государства. Основы конституционного строя

69. Конституция, как Основной Закон РФ

70. Международно-правовые способы разрешения международных споров
71. Основные принципы международного публичного права
72. Способы формирования муниципальной собственности: правовое регулирование и сравнительный анализ

73. Налоговое право как основной институт финансового права

74. Правовое государство. Понятие и основные черты. Правовой статус товарной и фондовой биржи

75. Особенности квалификации преступлений в сфере компьютерной информации

76. Основные виды деликтов в законах XII таблиц

77. Основные правовые нормы, регулирующие ввоз товаров на территорию России

78. Пробелы в праве и способы их устранения

79. Понятие, классификация и содержание основных функций государства

80. Основные правовые системы современности

Увлажненный порошок для чистки ковров "Vanish".
Увлажненный порошок Vanish для чистки ковров большой площади - это революционная разработка, которая поможет эффективно очистить и
527 руб
Раздел: Для ковров
Клей для ткани UHU Textil, 19 г.
Клей для ткани UHU Textil обеспечивает быстрое и прочное склеивание большинства видов ткани (хлопок, лен, джинса, смешанные ткани и т.д.)
307 руб
Раздел: Специальный (стекло, ткань)
Набор подарочный для новорождённого "Моя малышка".
Запечатлите мимолетные мгновения жизни Вашего ребенка с помощью необычного набора для новорождённого «Моя малышка». Рамка для
850 руб
Раздел: Прочие

81. Основные правовые системы современного мира

82. Основные концепции правопонимания

83. Основные правовые семьи мира

84. Способы перевода просторечия, использованного в романе А. Силлитоу "Ключ от двери", на русский язык

85. Способы выражения сомнения в современном немецком языке

86. Основные праздники Великобритании и США
87. Русский авангард. Основные направления и мастера
88. Основные достижения русской культуры XIX века: романтизм в России; корни русского романтизма; русская национальная музыкальная школа и живопись во второй половине XIX века

89. Основной 60 летний ритм развития культуры ХХ века 1923-1983 гг.

90. Книга как основное средство документной коммуникации

91. Основные праздники Великобритании и США

92. Особенности речи в средствах массовой информации

93. Способы образования неологизмов в терминологии в современном французском языке

94. Способы выравнивания когнитивного диссонанса в переводе поэтических произведений (на материале сонетов Шекспира)

95. Диалект как основная форма существования языка

96. Основные тенденции развития детского хорового творчества на современном этапе (на примере ведущих детских хоровых коллективов г.Минска)

Настольная игра «Пороховая бочка».
В игре могут принять участие 2 или 4 ребёнка. Поместите пирата на его бочку так, чтобы зажать выталкивающий механизм и по очереди
490 руб
Раздел: Игры на ловкость
Настольная игра "Скоростные колпачки".
Игра на ловкость рук и остроту глаза. Способствует развитию зрительно-моторной координации движений, концентрации внимания и зрительного
635 руб
Раздел: Игры на ловкость
Игра интерактивная "Супер магический Джинн".
Интерактивная игрушка "Супер магический Джинн" умеет без малейшего труда угадывать задуманные слова, поэтому ребенку придется
1549 руб
Раздел: Игры на ассоциации, воображение

97. Основные этапы жизни И.П. Павлова

98. Основные сражения Великой Отечественной войны

99. Основные понятия. Типы цивилизаций


Поиск Рефератов на сайте za4eti.ru Вы студент, и у Вас нет времени на выполнение письменных работ (рефератов, курсовых и дипломов)? Мы сможем Вам в этом помочь. Возможно, Вам подойдет что-то из ПЕРЕЧНЯ ПРЕДМЕТОВ И ДИСЦИПЛИН, ПО КОТОРЫМ ВЫПОЛНЯЮТСЯ РЕФЕРАТЫ, КУРСОВЫЕ И ДИПЛОМНЫЕ РАБОТЫ. 
Вы можете поискать нужную Вам работу в КОЛЛЕКЦИИ ГОТОВЫХ РЕФЕРАТОВ, КУРСОВЫХ И ДИПЛОМНЫХ РАБОТ, выполненных преподавателями московских ВУЗов за период более чем 10-летней работы. Эти работы Вы можете бесплатно СКАЧАТЬ.