Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
сделать стартовой добавить в избранное
Кефирный гриб на сайте www.za4et.net.ru

Биология Биология

Получение трансгенных животных

Фонарь садовый «Тюльпан».
Дачные фонари на солнечных батареях были сделаны с использованием технологии аккумулирования солнечной энергии. Уличные светильники для
106 руб
Раздел: Уличное освещение
Ночник-проектор "Звездное небо и планеты", фиолетовый.
Оригинальный светильник - ночник - проектор. Корпус поворачивается от руки. Источник света: 1) Лампочка (от карманных фонариков) 2) Три
330 руб
Раздел: Ночники
Горшок торфяной для цветов.
Рекомендуются для выращивания крупной рассады различных овощных и цветочных, а также для укоренения саженцев декоративных, плодовых и
7 руб
Раздел: Горшки, ящики для рассады

ВВЕДЕНИЕ В настоящее время используются несколько подходов в получении трансгенных животных. Наиболее широко распространен метод микроинъекций чужеродной ДНК (чДНК) в пронуклеусы зигот. Оптимальные условия для проведения микроинъекций в пронуклеусы зигот мышей описаны в работе Бринстера и соавторов (1994). Величина вводимой ДНК может достигать 30 Mb. Интеграция нескольких копий (от 1 до нескольких сотен) экзогенной ДНК в геном происходит, как правило, в одном сайте в ориентации &quo ;голова к хвосту&quo ; или &quo ;голова к голове&quo ;. При инъекции нескольких рекомбинантных конструкций, их встраивание в геном, также происходит в одном сайте. Другой подход в получении трансгенных животных заключается в инфицировании ранних эмбрионов млекопитающих рекомбинант-нымиретровирусами. Недостатком этого метода является получение трансгенных животных с мультисайтовой интеграцией трансгена и его нестабильной наследуемостью в поколениях. Еще одним подходом в получении трансгенных животных является использование трансформированных чужеродной ДНК, эмбриональных стволовых клеток, путем инъекции последних в полость бластоцисты. Основным преимуществом данного метода является возможность проводить направленный мутагенез на уровне целого организма, при помощи гомологичной рекомбинации чужеродной ДНК с геномной ДНК. Для получения трансгенных животных использовались и другие методы, к которым относятся: применение сперматозоидов, обработанных экзогенной ДНК, для оплодотворения яйцеклеток в условиях i vi ro; использование липосом в качестве вектора чужеродной ДНК. Однако, эти методы имеют значительно менее широкое распространение, в сравнении с методом микроинъекции чужеродной ДНК в пронуклеус зиготы. 1. МЕТОДЫ ТРАНСГЕНЕЗА В ЖИВОТНОВОДСТВЕ Трансгенные животные - это индивидуумы, в геном которых искусственно введена дополнительная генетическая информация (трансген). Такая информация представляет собой либо отдельный участок ДНК с собственными (гомологичными) регуляторными последовательностями (эукариотическая транскрипционная единица), либо сконструированный из различных молекул ДНК гибридный (рекомбинантный) ген. Таким образом, трансген - это искусственно введенный и интегрировавшейся в ДНК животных чужеродный ген. Под трансгенезом понимают процесс переноса и интеграции чужеродной генетической информации в геном животных. 1.1 Метод микроинъекции Впервые о получении трансгенных сельскохозяйственных животных сообщили две лаборатории в США и Германии . В обоих случаях для переноса генных конструкций в эмбриональные линии был использован метод микроинъекции. Этот метод и сегодня остается наиболее широко используемым для трансгенеза в животноводстве. Суть метода микроинъекции заключается во введении раствора генных конструкций в мужской пронуклеус зигот. Обычно инъецируют 1-2 пкл раствора ДНК в концентрации, соответствующей 1000 копиям в 1 пкл микроинъекционного раствора. При этом исходят из того, что количество 1000 копий/пкл приблизительно соответствует концентрации X нг/мкл, где X - длина генной конструкции в тысячах парах нуклеотидов (т.п.н

). Например, если длина генной конструкции равна 10 т.п.н., то количество 1000 копий в 1 пкл будет достигаться при концентрации равной 10 нг/мкл. Для более точного расчета концентрации генных конструкций используют следующую формулу: Число копий (копий плк) = 6,023 1023 С 10-9 /Mr, где 6,023 1023 - число копий в 1 М растворе; С - концентрация ДНК . Для расчета концентрации измеряют оптическую плотность раствора генной конструкции на спектрофотометре при длине волны 260 нм. 1 OD соответствует концентрации двуточечной ДНК равной 50 мкг/мл. При расчете молекулярной массы исходят из того, что молекулярная масса 1 п.н. равна 6,6 108 мг/моль. Об успешном выполнении микроинъекции судят по увеличению объема пронуклеуса в 1,5-2 раза . В эмбрионах мышей кроликов, овец и коз пронуклеусы достаточно хорошо визуализируются под микроскопом при увеличении х400 без выполнения каких-либо дополнительных манипуляций. Что касается эмбрионов свиней и крупного рогатого скота, то вследствие наличия в цитоплазме темных липидосодержащих гранул определение местоположения пронуклеусов в них затруднено. Для смещения этих гранул к краям эмбриона и облегчения тем самым локализации пронуклеусов выполняют центрифугирование эмбрионов свиней и КРС при 15000 об/мин в течение 3 мин. . По завершении микроинъекции эмбрионы культивируют несколько часов до момента их пересадки в яйцевод синхронизированных реципиентов. Эмбрионы КРС культивируют i vi ro в течение 6-7 дней до достижения ими стадий морулы или бластоцисты и затем выполняют пересадку в матку синхронизированных реципиентов. После рождения от всех животных отбирают пробы ткани для анализа на интеграцию трансгена. Степень интеграции, то есть число трансгенных животных от общего числа родившихся животных, при использовании метода микроинъекции в зависимости от вида животных колеблется в незначительных пределах. Так, у мышей этот показатель в среднем составляет 15%, у свиней - 10-15%, у кроликов - 10%, у овец, коз и КРС -5-10% . Наиболее важным, с точки зрения затрат, требующихся для получения одного трансгенного животного, является показатель общей эффективности трансгенеза, который рассчитывается как отношение числа полученных трансгенных животных к общему числу пересаженных эмбрионов, выраженное в процентах. Величина этого показателя также относительно постоянна и составляет у мышей -2%, у кроликов 1%, у овец и коз – 0,5 – 1%, у свиней и КРС – 0,5%. На частоту интеграции оказывает влияние степень очистки инъекционного раствора, форма и концентрация ДНК, состав буферного раствора, качество эмбрионов, способ пересадки эмбрионов реципиентам (нехирургический, хирургический, лапароскопический). При использовании раствора MSOF(синтетическая среда эмбрионов) для микроинъекции зигот крупного рогатого скота (Hagema ) было показано, что инъекция раствора MSOF не оказывала влияния на жизнеспособность эмбрионов крупного рогатого скота, полученных i vi ro. Так, доли эмбрионов, развившихся до стадии бластоцисты, в группах MSOF и контрольной составляли, соответственно, 27,6% и 27,5%. В группе ТЕ до стадии бластоцисты развились лишь 13,9% инъецированных зигот.

Сопоставляя результаты двух приведенных выше исследований, можно предположить, что буфер MSOF окажется более эффективным по сравнению со стандартным раствором ТЕ для получения трансгенного крупного рогатого cкота и других видов сельскохозяйственных животных. Не смотря на достигнутые в области трансгенеза успехи, эффективность получения трансгенных сельскохозяйственных животных остается очень низкой что побуждает исследователей искать новые подходы. Одним из путей повышения эффективности трансгенеза является разработка методов оценки эмбрионов на трансгенность перед ихпересадкой реципиентам. К ним относится использование в конструкциях репортерных генов, таких как &be a;-галактозидаза, щелочная фосфотаза и др., а также определение трансгенов в эмбрионах методом ПЦР и флюоресцентной гибридизации. Не смотря на использование большого числа маркеров, не было разработано системы, позволяющей повысить эффективность трансгенеза у сельскохозяйственных животных. Основные подходы, исполбзующиеся в настоящее время: 1.2 Использование ретровирусных векторов Результативным способом переноса ДНК в эмбриональные линии животных является применение ретровирусных векторов. Ретровирусы – семейство эукариотических вирусов, генетический материал которых представлен одноцепочечной РНК. Вирусы состоят покрытых липопротеидной оболчкой вирусных частиц диаметром 70-120 нм и внутренней капсулы икосаэдрической формы, которая содержит две копии геномной РНК длиной 5-10 тысяч пар нуклеотидов в форме рибонуклеопротеида. Внешняя оболочка вируса является частью цитоплазматической мембраны клетки хозяина и представлена короткими гликопротеидами. Эндогенные ретровирусы являются хромосомными элементами и составляют до 1% ДНК в геноме человека . Эндогенные ретровирусы являются одной из разновидностей ретроэлементов, составляющих до 10% генома млекопитающих. По своей способности инфицировать клетки хозяина ретровирусы подразделяются на экотропные и амфотропные. Экотропные вирусы способны реплицироваться в клетках только одного или нескольких близко родственных видов животных. Так, например, вирус лейкемии мыши (MLV) размножается только в клетках мыши и крысы. Амфотропные вирусы, наоборот, имеют широкий спектр хозяев и способны к размножению в клетках различных видов млекопитающих. Геном всех способных к репликации ретровирусов устроен аналогичным образом и состоит из трех кодирующих регионов, которые, не смотря на то, что речь идет о последовательностях РНК, получили название генов. Ген gag кодирует белки капсида и вирусного кора. Ген pol кодирует вирусную реверсивную транскриптазу и другие связанные с вирусом нуклеазы. Ген e v кодирует гликопротеиды в вирусной липидной оболочке. Геномные РНК ретровирусов содержат на свох концах повторяющиеся последовательности, которые в зависимости от типа вируса имеют длину от 10 до 80 нуклеотидов. Они получили название R-сегментов. На 3' конце геномной РНК R-сегмента расположен регион U3 длиной 170-1250 нуклеотидов, а на 5' конце r-сегмента регион u5 длиной 80-100 нуклеотидов.При образовании ДНК-копии вирусного РНК-генома на концах молекулы происходят изменения: на 5' конце располагается сегмент U3, а на 5' – U5.Т

Гемолитическая болезнь новорождённых), воздействии некоторых химических агентов, холода; у чувствительных лиц — при приёме некоторых лекарственных веществ, вдыхании пыльцы некоторых растений и др. При патологической Г. разрушение эритроцитов происходит во всех клетках ретикулоэндотелиальной системы (печень, костный мозг, лимфатические узлы и др.), а также может наблюдаться в сосудистом русле. В этом случае большая часть гемоглобина разрушенных эритроцитов связывается со специфическим белком — гаптоглобином, а избыток, проходя через почечный фильтр, обнаруживается в моче — гемоглобинурия. Распад сразу большой массы эритроцитов (например, при гемолитических анемиях) сопровождается тяжёлым состоянием организма (гемолитический шок) и может привести к смерти.   Г. может возникнуть в долго хранящейся консервированной крови, что делает её непригодной для обычных переливаний.   А. М. Полянская. Гемолизины Гемолизи'ны, вещества, способные освобождать гемоглобин из эритроцитов крови; при этом гемоглобин растворяется в плазме или окружающей жидкости и кровь (или взвесь эритроцитов) становится прозрачной (лаковая кровь). Г. — продукты жизнедеятельности многих бактерий (стафилококков, стрептококков и др.), паразитических червей, насекомых, скорпионов, некоторых ядовитых змей (лизолецитины). Г. могут присутствовать в сыворотке крови (нормальные Г.) и лизировать собственные эритроциты (аутогемолиз); однако чаще они появляются после внутривенного введения эритроцитов, полученных от животных того же вида (изолизины) или др. вида (гетеролизины)

1. Материальная выгода при получении заемных средств как объект НДФЛ

2. Изучение возможности использования экстракта корня солодки голой как профилактического средства дизадаптации в спорте

3. Трансгенные растения как биопродуценты белков медицинского назначения

4. Изучение возможности использования экстракта корня солодки голой как профилактического средства дизадаптации в спорте

5. Пептидные антибиотики животных как биохимические факторы противоинфекционной защиты

6. Нынешнее состояние и перспективы развития лесного хозяйства, лесной, деревообрабатывающей и целлюлозно-бумажной промышленности
7. Современное направление развития турагентской деятельности в РФ: проблемы и перспективы
8. Наименее развитые страны в структуре мировой экономики и перспективы их развития

9. Развитие грамматических навыков при использовании игр на уроках немецкого языка в шестом классе

10. Развитие сельского хозяйства и промышленности России на рубеже 19-20 веков

11. Создание фермерского хозяйства или использование ресурсов земли

12. Влияние интернета на развитие гостиничного хозяйства

13. Использование процессов, присущих объемному взрыву в различных областях народного хозяйства

14. Рынок как форма организации общественного хозяйства

15. Периодизация становления и развития мирового хозяйства

16. Животноводство как важнейшая отрасль сельского хозяйства

Шкатулка ювелирная "Moretto", 18x13x10 см (2 яруса).
Регулярно удалять пыль сухой, мягкой тканью. Материал: MDF. Размер: 18x13x10 см. 2 яруса. Товар не подлежит обязательной сертификации.
1445 руб
Раздел: Шкатулки для украшений
Табурет "Плетенка" складной (малый).
Табурет, сделанный из пластмассы высокого качества. Ширина: 310 мм. Длина: 270 мм. Высота: 275 мм. Размеры сидения: длина - 230 мм, ширина
321 руб
Раздел: Стульчики
Кукла Нэни, в розовом жакете.
Испанская компания Magic Baby представляет серию кукол Нэни (Nany), которые подарят ребенку бесчисленные часы радости и детства! Это
2566 руб
Раздел: Классические куклы

17. Развитие сельского хозяйства в период НЭПа

18. Характерные особенности развития сельского хозяйства Японии после Второй мировой войны

19. Мировое хозяйство: закономерности формирования, тенденции и проблемы развития

20. Современные структурные и региональные сдвиги в развитии мирового хозяйства

21. О недостатках региональных целевых программ развития дорожного хозяйства

22. Использование композиционных пластмасс в народном хозяйстве
23. Современное развитие гостиничного хозяйства Республики Беларусь
24. Государственная социальная политика Республики Беларусь. Система государственного прогнозирования и программирования социально-экономического развития народного хозяйства Республики Беларусь

25. Предприятие как первичное звено народного хозяйства, экономические показатели его деятельности

26. Животный мир как объект охраны и использования

27. Использование детских рисунков как средства диагностики и коррекции психического развития детей

28. Проблемы использования трудового потенциала как элемента социально-экономического развития предприятия

29. Расчеты с использованием банковских пластиковых карточек: перспективы их развития в Республике Беларусь

30. Вексель как одна из новейших форм банковского дела Беларуси. Перспектива развития вексельного обращения на современном этапе

31. Информатика как наука: развитие и перспективы

32. Механизм получения стволовых клеток, проблемы и перспективы использования их в медицине

Чайник со свистком Nadoba "Virga", 2,8 л.
Чайники серии Virga изготовлены из высококачественной нержавеющей стали 18/10. Прочное трехслойное капсульное дно изделий не деформируется
2499 руб
Раздел: Чайники из нержавеющей стали
Настольная игра "Колорама".
Ты знаешь цвета и формы? Красные круги, желтые четырехугольники, синие треугольники - пестрая неразбериха! На костях выброшен квадрат и
1363 руб
Раздел: Классические игры
Фломастеры "Замок", 50 цветов.
Количество цветов: 50. Очень качественные фломастеры. Чернила на водной основе и натуральных красителях. Яркие, насыщенные
761 руб
Раздел: Более 24 цветов

33. Использование дымковской игрушки на занятиях по лепке, как средство развития творческих способностей старших дошкольников

34. Возможные перспективы развития Патриарших садов как центра экологического туризма во Владимире

35. Перспективы развития аэрокосмической отрасли Украины

36. Основные проблемы и перспективы развития и размещения отраслей агропромышленного комплекса в Донецком экономическом районе

37. Пищевая промышленность Украины. Проблемы и перспективы развития

38. Перспективы развития петербургского порта
39. Значение газа и перспективы развития газовой отрасли в Казахстане
40. Рынок земли в современной Российской экономике и перспективы его развития при сложившейся экономической ситуации

41. Земельный кадастр как инструмент регулирования социально-экономического развития города (на примере г. Екатеринбурга)

42. Налоги: тенденции, перспективы развития

43. Налоговая политика России: тактика и стратегия, позитивные и негативные тенденции и перспективы развития

44. Земля как объект использования и охраны в Республике Молдова

45. Дикость, варварство и цивилизация как ступень развития общества

46. Зарубежные статистические пакеты: возможности, недостатки, перспективы развития

47. Проблемы использования и пути развития интернет-компьютерных технологий в России

48. Перспективы развития компьютерной техники

Ракета "Мир".
Модель 2018 года. Боковые разгонные блоки отделяются одновременно при перемещении оранжевого кольца вверх, следующая ступень также
412 руб
Раздел: Космический транспорт
Пакеты фасовочные, 10(+8)x27 см (1000 штук).
Область применения: расфасовка, упаковка продуктов питания и товаров народного потребления как на производстве, так и в быту. Размер:
306 руб
Раздел: Пакеты для продуктов
Самоклеящиеся этикетки, A4, 105x74 мм, 8 этикеток на листе.
Формат: А4. Размер: 105x74 мм. В комплекте: 100 листов (на 1 листе 8 этикеток).
500 руб
Раздел: Бейджи, держатели, этикетки

49. Перспективы развития компьютерной техники (новейшие разработки 2005г.)

50. Программа эмуляции развития популяций животных

51. Зарубежные Статистические Пакеты: описание, возможности, недостатки, перспективы развития

52. Здоровый образ жизни, как условие гармоничного развития детей, первичной профилактики заболеваний и вредных привычек

53. Риформинг как способ получения бензинов с улучшенными характеристиками

54. Рациональное использование и охрана животных
55. Концепции устойчивого развития как выражение взаимоотношений "общество- природа"
56. Воспитание как развитие, сохранение и преобразование человеческого качества в педагогическом взаимодействии

57. Индивидуализация и дифференциация образовательного процесса как условие развития личности современного школьника

58. Классный руководитель как организатор нравственного развития учащихся

59. Дидактическая игра как средство развития познавательного интереса учащихся на уроках математики

60. Проблемы использования и пути развития интернет-компьютерных технологий в России

61. Получение, использование цемента и его продуктов (Доклад)

62. Ветроэнергетика. Перспективы использования в Республике Беларусь

63. Перспективы развития автомобильного двигателестроения (zip 1.6 Mb)

64. Развитие психики человека и животного по А.Н. Леонтьеву

Заварочный чайник "Mayer & Boch", 1,25 л.
Заварочный чайник изготовлен из термостойкого стекла, фильтр выполнены из нержавеющей стали. Изделия из стекла не впитывают запахи,
368 руб
Раздел: Чайники заварочные
Конструктор "Цветной городок" большой (41 деталь).
Это настоящий, красочный город, состоящий из множества деревянных деталей (их 41). В нем много домов, построенных из деталей, в виде
584 руб
Раздел: Деревянные конструкторы
Портфолио школьника.
Портфолио школьника – это папка, в которой собрана жизнь ученика, начиная с первого класса, все то, о чем не рассказали краткие
391 руб
Раздел: Портфолио

65. Личность как продукт общественно-исторического развития

66. Получение и использование электрической энергии

67. Перспективы развития физической культуры и спорта в современной России

68. Молекулярная нанотехнология и перспективы её развития

69. Нанотехнология. Перспективы развития

70. Кредитные операции коммерческих банков и перспективы их развития
71. Понятие электронных денег, их использование и перспективы
72. Аудиторская деятельность и перспективы ее развития в Киргизской Республике

73. Анализ состояния и перспективы развития рынка Интернет-рекламы в России

74. Перспективы развития консалтинговых услуг России. Руководство: власть и партнерство

75. Проблемы и перспективы развития малого предпринимательства в России

76. Социальный и человеческий капитал как факторы благосостояния и развития

77. Вексельное обращение и перспективы его развития в РФ

78. Цикличность - как форма экономического развития

79. ФОРМИРОВАНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ СИСТЕМЫ ИПОТЕЧНОГО ЖИЛИЩНОГО КРЕДИТОВАНИЯ СТРОИТЕЛЬСТВА В УСЛОВИЯХ ТРАНЗИТИВНОЙ ЭКОНОМИКИ

80. Свободные экономические зоны России и перспективы их развития

Багетная рама "Isabelle" (золотой), 30х40 см.
Багетные рамы предназначены для оформления картин, вышивок и фотографий. Оформленное изделие всегда становится более выразительным и
651 руб
Раздел: Размер 30x40
Набор для черчения "College", 9 предметов.
В набор входит: циркуль 14 см с одной сгибаемой ножкой, циркуль - измеритель, удлинитель, кронциркуль, механический карандаш, контейнер с
539 руб
Раздел: Циркули, чертежные инструменты
Детский трехколесный велосипед Jaguar (цвет: синий).
Облегченный трехколесный велосипед с родительской ручкой, для малышей от 2 до 4 лет. Удобный, маневренный, отличная модель для получения
2500 руб
Раздел: Трехколесные

81. Международный туризм: состояние и перспективы развития

82. Рекреационный потенциал, проблемы и перспективы развития туризма в Камчатской области

83. Перспективы становления и развития гражданского общества в современной России

84. Распространение технических знаний в России в XIX – начале XX вв. как предпосылка развития философии техники в Росcии

85. Перспективы и развития сельских АТС

86. История возникновения и развития парков. Парк как социально-культурный институт
87. Развитие новых жанров искусства, как технической революции
88. Использование символа как стилистического средства в поэзии символизма (на примере лирики Стефана Георге)

89. Общие требования к рекламе, особенности и перспективы развития на российском рынке

90. Внутрифирменное обучение как технология развития кадрового потенциала организации

91. Иностранные инвестиции как источник развития малого и среднего бизнеса.

92. Внутрифирменное обучение как технология развития кадрового потенциала организации

93. Формирование венчурных сетей как стратегическое направление развития инновационного бизнеса

94. Процветание навечно: какую выбрать стратегию развития для своего бизнеса

95. Единый социальный налог: сущность и перспективы развития

96. Тенденции и перспективы развития местных налогов

Набор чернографитовых карандашей "Art", 12 штук.
Набор чернографитовых карандашей содержит 12 заточенных карандашей различной твердости - 2Н, Н, F, HB, В, 2В, 3В, 4В, 5В, 6В, 7В,
405 руб
Раздел: Чернографитные
Настольная игра "Проныры".
Новая игра — уникальная шестиуровневая ходилка. Игроки собирают припасы и перемещаются с поля на поле через специальные потайные лазы.
1192 руб
Раздел: Игры с фигурками
Кружка-хамелеон "Кран с монетками".
Хотите по-настоящему регулировать денежные потоки? Налейте в чашку-хамелеон горячий напиток, и из крана на рисунке «польются» золотые
390 руб
Раздел: Кружки

97. Озонолиз как способ очистки и получения новых полезных нефтепродуктов

98. Порошковая металлургия и дальнейшая перспектива ее развития

99. Как я вижу использование Интернет-технологии в своей организации?

100. ИТ как средство развития познавательной активности и творческих способностей школьников с нарушениями зрительного анализатора


Поиск Рефератов на сайте za4eti.ru Вы студент, и у Вас нет времени на выполнение письменных работ (рефератов, курсовых и дипломов)? Мы сможем Вам в этом помочь. Возможно, Вам подойдет что-то из ПЕРЕЧНЯ ПРЕДМЕТОВ И ДИСЦИПЛИН, ПО КОТОРЫМ ВЫПОЛНЯЮТСЯ РЕФЕРАТЫ, КУРСОВЫЕ И ДИПЛОМНЫЕ РАБОТЫ. 
Вы можете поискать нужную Вам работу в КОЛЛЕКЦИИ ГОТОВЫХ РЕФЕРАТОВ, КУРСОВЫХ И ДИПЛОМНЫХ РАБОТ, выполненных преподавателями московских ВУЗов за период более чем 10-летней работы. Эти работы Вы можете бесплатно СКАЧАТЬ.