Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
сделать стартовой добавить в избранное
Кефирный гриб на сайте www.za4et.net.ru

Медицина Медицина     Медицина Медицина

Принципы иммуноферментного анализа, основные виды ИФА, применение в диагностике

Наклейки для поощрения "Смайлики 2".
Набор для поощрения на самоклеящейся бумаге. Формат 95х160 мм.
19 руб
Раздел: Наклейки для оценивания, поощрения
Ручка "Шприц", желтая.
Необычная ручка в виде шприца. Состоит из пластикового корпуса с нанесением мерной шкалы. Внутри находится жидкость желтого цвета,
31 руб
Раздел: Оригинальные ручки
Ручка "Помада".
Шариковая ручка в виде тюбика помады. Расцветка корпуса в ассортименте, без возможности выбора!
25 руб
Раздел: Оригинальные ручки

Реферат Самойликов Павел Владимирович интерн кафедры «Клинической лабораторной диагностики» Российский государственный медицинский университет 2009 г. Введение. Методы иммунного анализа широко вошли в медицинскую практику. Во всех областях современной медицины используется иммунный анализ, преимущественно, с диагностической и аналитической целями. Особенно важно, что они дают возможность идентифицировать биологические компоненты (гормоны, ферменты, нейропептиды, продукты иммунной системы, антигены и т.д.) в низких и очень низких концентрациях. Все продукты, против которых возможно получение антител, выявляются этими методами. Иммунный анализ основывается на взаимодействии антигена (АГ) и антитела (АТ) с использованием различных вариантов мечения одного из компонентов (фермент, радионуклид, флуоресцентный краситель и другие). Оценка реакции проводится автоматически на специальной аппаратуре, что позволяет стандартизировать эти методы. В зависимости от типа используемой метки и условий постановки теста иммунный анализ обозначается как иммуноферментный (ИФА), радиоиммунный (РИА), иммунофлуоресцентный и другие. При постановке реакций в один или несколько этапов они обозначаются как прямые или непрямые. Имеет значение среда, в которой проводится реакция. Если реакция проводится с реагентами, фиксированными на поверхности, то тест обозначается как твердофазный, например ELISA (e zyme li ked immu osorbe assay). В данной работе будет рассмотрен только иммуноферментный анализ & dash; метод широко распространенный в биологии и медицине, как практической, так и фундаментальной. Иммуноферментный анализ. ИФА появился в середине 60-х годов и первоначально был разработан как метод для идентификации антигена в гистологическом препарате, а также для визуализации линий преципитации в тесте иммунодифузии и иммуноэлектрофореза, а затем стал использоваться для количественного определения антигенов и антител в биологических жидкостях. В разработке метода принимали участия Е. Энгвалл и Р. Пэлман, а также независимо от них В. Ван Вееман и Р. Шурс. Рисунок 1. Основной принцып ИФА. 1) Для выявления антигенов. 2) Для выявления антител. Метод основан на специфическом связывании антитела с антигеном, при этом один из компонентов конъюгирован с ферментом, в результатереакции с соответствующим хромогенным субстратом образовывается окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически (рис. 1). Открытие возможности иммобилизации антигена и антитела на различных носителях с сохранением их связывающей активности позволило расширить использование ИФА в различных областях биологии и медицины. Появление моноклональных антител послужило дальнейшему развитию ИФА, что позволило повысить его чувствительность, специфичность и воспроизводимость результатов. Теоретически ИФА основывается на данных современной иммунохимии и химической энзимологии, знании физико-химических закономерностей реакции антиген-антитело, а также на главных принципах аналитической химии. Чувствительность ИФА и время его проведения определяется несколькими основными факторами: кинетическими, термодинамическими характеристиками реакции антиген-антитело, соотношением реагентов, активностью фермента и разрешающей способностью методов его детекции.

В общем виде реакция антиген-антитело может быть описана простой схемой: Разнообразие объектов исследования от низкомолекулярных соединений до вирусов и бактерий, а также необычайно широкий круг задач, связанных с многообразием условий применения ИФА, обусловливают разработку чрезвычайно большого количество вариантов этого метода. Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии: 1. стадия узнавания тестируемого соединения специфическим к нему антителом, что ведет к образованию иммунного комплекса; 2. стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания; 3. стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал. Классификация ИФА. В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов: 1. По типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА, различают конкурентный и неконкурентный методы. А) В конкурентном ИФА на первой стадии в системе присутствуют одновременно анализируемое соединение и его аналог, меченный ферментном и конкурирующий за центры специфического связывания с ним. Б) Для неконкурентных методов характерно присутствие в системе на первой стадии только анализируемого соединения и специфичных к нему центров связывания. 2. Все методы ИФА делются на гомогенные и гетерогенные. Если все три стадии ИФА проходят в растворе и между основными стадиями нет дополнительных этапов разделения образовавшихся иммунных комплексов от непрореагировавших компонентов, метод относится к группе гомогенных. В основе гомогенного ИФА, применяемого, как правило, для определения низкомолекулярных субстанций, лежит ингибирования активности фермента при его соединении с антигеном или антителом. Активность фермента восстанавливается в результате реакции антиген-антитело. При связывании антитела с антигеном, содержащим ферментную метку, происходит ингибирование активности фермента на 95% по отношению к высокомолекулярному субстрату, что обусловлено стерическим исключением субстрата из активного центра фермента. По мере увеличения концентрации антигена связывается все больше антител и сохраняется все больше свободных конъюгатов антиген-фермент, способных гидролизовать высокомолекулярный субстрат. Анализ проводят очень быстро, для одного определения требуется 1 минута. Чувствительность метода достаточно высока. С его помощью можно определить вещество на уровне пикомолей. Для гетерогенных методом характерно проведение анализа в двухфазной системе с участием твердой фазы & dash; носителя, и обязательная стадия разделения иммунных комплексов от непрореагировавших компонентов (отмывка), которые находятся в разных фазах (образовавшиеся иммунные комплексы находятся на твердой фазе, а непрореагировавшие комплексы & dash; в растворе). Гетерогенные методы, в которых формирование иммунных комплексов на первой стадии протекает на твердой фазе, называют твердофазными методами. Методы относятся к гомогенно- гетерогенным, если 1 стадия & dash; образование специфических комплексов происходит в растворе, а затем для разделения компонентов используют твердую фазу с иммобилизированным реагентом. 3. По принципу определения тестируемого вещества: А) Прямое определение концентрации вещества (антигена или антитела) по числу провзаимодействующих с ним центров связывания.

В этом случае ферментная метка будет находиться в образовавшемся специфическом комплексе АГ-АТ. Концентрация определяемого вещества будет прямо пропорциональна регистрируемому сигналу. Б) Определение концентрации вещества по разности общего числа мест связывания и оставшихся свободными центров связывания. Концентрация определяемого вещества при этом будет возрастать, а регистрируемый сигнал снижаться, следовательно, в данном случае прослеживается обратная зависимость от величины регистрируемого сигнала. Характеристика компонентов, используемых в ИФА. Ферменты. Ферментные метки обладают чрезвычайно мощьным каталитическим действием, одна молекула фермента может реагировать с большим количеством молекул субстрата. Таким образом, фермент, присутствующий в ничтожных количествах, можно выявить и количественно определить по образованию продуктов, катализируемой им реакции. Другое преимущество применения ферментов в качестве меток обусловлено наличием в молекуле многочисленных функциональных групп (сульфгидрильных, карбоксильных, остатков тиразина и др.), через которые можно ковалентно присоединить молекулы лиганда. Ферментные маркеры, используемые в ИФА, должны обладать следующими свойствами: & dash; высокая активность и стабильность фермента в условиях анализа, при модификации и в конъюгате с антителами или другими белками; & dash; наличие чувствительных субстратов и простота метода определения продуктов или субстратов ферментативной реакции; & dash; возможность адаптации субстратных систем к дальнейшему усилению; & dash; отсутствие фермента и его ингибиторов в исследуемой биологической жидкости. В ИФА может использоваться не менее 15 различных ферментов. Наибольшее применение, в соответствии с вышеназванными требованиями, нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфотаза (ЩФ) и &be a;-D-галактозидаза (табл.1). Все три стабильны и катализируют высокочувствительные реакции. Кроме того, продукты, получаемые в результате реакций, катализируемых этими ферментами, в зависимости от используемого субстрата, могут выявляться не только колориметрическими методами, но также флуоресцентными методами. Другие ферменты используются значительно реже. Это объясняется их более низкой в сравнении с ПХ и ЩФ удельной активностью. Субстраты. Выбор субстрата в первую очередь определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция фермент-субстрат высоко специфична. Основные требования к субстрату: & dash; обеспечение высокой чувствительности метода при выявлении фермента в конъюгате; & dash; образование хорошо учитываемых (например, окрашенных) продуктов реакции фермент-субстрат; & dash; субстрат должен быть безопасным, дешевым, доступным и удобным для применения. Таблица 1. Ферменты и их субстраты наиболее широко используемые в ИФА. Фрмент Источник получения М.М. (кДа) Субстрат (рекомендуемая длина волны при фотометрии, нм) Конъюгирующий реагент Пероксидаза хрена Хрен (Armoracia rus ica a) 40 О-фенилендиаминдигидро-хлорид (ОФД, 492 нм) 5-аминосалициловая кислота (450 нм), диаминобензидин, о-дианизидин. Глутаральдегид Мета-периодат натрия -сукцинимидил-3 (2-пиридилдитио) пропионат &be a;-D-галак-тозидаза E.

Это правило применяется вне зависимости от того, указан ли тот или иной вид деятельности в учредительных документах или нет[55]. Анализ устава ООО показал, что основным видом деятельности общества является садоводство, выращивание плодовых и ягодных культур, а также разведение овец, коз лошадей, крупного рогатого скота. Данное обстоятельство свидетельствует о том, что ООО является сельскохозяйственным товаропроизводителем и намеривается использовать приобретенную землю по назначению. Как справедливо указано в решении, Учреждение Юстиции исходило из предположения о нарушении принципа целевого использования, что не может быть признано законным. Отказывая в регистрации, Учреждение сослалось на нарушение права преимущественной покупки, предусмотренного в ст.8 ФЗ "Об обороте земель сельскохозяйственного назначения". В соответствии с п.2 ст.270, п.2 ст.288 АПК РФ, применение при вынесении решения закона, который не может быть использован в спорном правоотношении, является основанием для отмены судебного акта судом апелляционной и кассационной инстанций

1. Модемы: назначение, сравнительный анализ моделей, принцип работы, эксплуатация на примере конкретной модели

2. Основные принципы содержательно-тематического анализа текста

3. Принципы расчета и анализа длительности производственного цикла сложного процесса

4. Принципы построения и функционирования различного вида генераторов колебаний

5. Сравнительный анализ развития рынков: оценка, анализ и прогонозирование спроса и предложения, цен и их динамики

6. Финансовый анализ как инструмент сравнительного анализа положения фирм в отрасли: обобщенные финансовые таблицы
7. Анализ почв и агрохимический анализ
8. Анализ теории спроса и предложения (по книге К.Р. Макконнела и С.Л. Брю «Экономикс: принципы, проблемы и политика»)

9. Принципы психологического анализа в романе Л.Н.Толстого "Война и мир"

10. Принципы правового регулирования малого бизнеса: сравнительный анализ

11. Социальная ситуация в лесном комплексе и общие принципы ее анализа

12. Анализ принципов управления сельскими социально-производственными организациями в переходный период

13. Иммуноферментный анализ с усиленной хемилюминесценцией

14. Принципы системного анализа процессов и аппаратов экологически чистых технологий

15. Юридическая ответственность: понятие виды и принципы

16. Происхождение права, теории происхождения права, понятие признаки, виды, функции, принципы

Увлекательная настольная игра "Турбосчет".
Настольная игра "Турбосчёт" - весёлая и очень динамичная обучающая игра, которая мгновенно увлекает и детей, и взрослых. Правила
392 руб
Раздел: Математика, цифры, счет
Бутылка под оливковое масло "Тоскана", 18x8,5x24 см, 1100 мл.
Бутылка под оливковое масло. Размер: 18x8,5x24 см. Материал: доломит. Объем: 1100 мл.
315 руб
Раздел: Ёмкости для масла, уксуса
Сковорода гриль-газ, мраморное антипригарное покрытие.
Гриль-газ для приготовления мяса и рыбы без жира в домашних условиях исключительно на газовых птитах. Материал углеродистая сталь.
1153 руб
Раздел: Сковороды гриль

17. Учет и анализ доходов организации от обычных видов деятельности

18. Макроэкономический анализ инфляции: её виды, причины и последствия

19. Виды и принципы создания совместных предприятий в России

20. Принципы, механизмы и основные направления регулирования земельных отношений. Виды и формы земельной собственности. Субъекты и объекты земельных отношений

21. Виды анализа

22. Классификация видов экономического анализа
23. Поняття, види та принципи страхування
24. Учет, аудит и анализ доходов и расходов обычной деятельности (по видам деятельности)

25. Понятие, основные принципы и виды государственной службы

26. Сравнительные анализы видов договоров Гражданского кодекса Российской Федерации

27. Види, параметри та принцип роботи антен

28. Анализ применения различных видов рекламы в зависимости от жизненного цикла товара

29. Фармакогкостический анализ видов маклеи

30. Фармакогностический анализ лекарственных видов шалфея

31. Виды и анализ инвестиционных проектов

32. Сравнение как метод анализа. Виды и уровни сравнительных исследований

Глобус Земли, физический, 320 мм.
Глобус Земли физический. Диаметр: 320 мм. На пластиковой подставке.
711 руб
Раздел: Глобусы
Телескопическая ложка.
Прикольный подарок, который рассмешит участников любого застолья. При помощи этой ложки Вы можете с невозмутимым видом «подцепить»
397 руб
Раздел: Прочее
Этикетка самоклеящаяся, А4, 1 этикетка, 210х297 мм, белая, 100 листов.
Размер этикетки: 210х297 мм. 1 этикетка на листе А4. Плотность бумаги: 70 г/м2. Верхнее и нижнее поле (отступ от края листа до этикетки):
660 руб
Раздел: Бейджи, держатели, этикетки

33. Анализ видов понятий и предложения по их использованию в практике логического обобщения выводов

34. Теория хроматографии, хроматографический анализ, виды хроматографии

35. Анализ производства и использования основных видов продукции растениеводства ЗАО "Зайцевское"

36. Основные понятия и виды экономического анализа

37. Реактивные двигатели, устройство, принцип работы

38. Анализ устойчивости и поддержание орбитальной структуры космической системы связи
39. Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобулинов стерляди
40. Генетический анализ при взаимодействии генов

41. Основные принципы создания группировок войск для сражения, принятия решения командованием и организации управления

42. Статистика населения. Методы анализа динамики и численности и структуры населения

43. Анализ рынка углеводородов стран Центральной и Южной Азии

44. Анализ экономики США

45. Статистический анализ демографической ситуации в Российской Федерации

46. Принцип построения налога на добавленную стоимость

47. Анализ доходов бюджета Российской Федерации

48. Нормативный и позитивный подход при анализе деятельности государства

Дополнительный набор "Что мне надеть".
Игра представляет собой традиционную и любимую многими поколениями девочек игру, позволяющую менять наряды на нарисованной кукле,
323 руб
Раздел: Игры на магнитах
Коврик для сборки пазлов.
Специальный коврик для сборки пазлов удобен тем, что собираемый пазл не деформируется и не распадается. Коврик незаменим для хранения
565 руб
Раздел: Сопутствующие товары для пазлов
Бумага "IQ Color", А4, 80 г/м2, 5 цветов по 50 листов, цветная пастель.
Формат: А4. Плотность: 80 г/м2. Цвета: кремовый, желтый, розовый, зеленый, голубой. 250 листов в пачке (5 цветов по 50 листов). Прекрасная
595 руб
Раздел: Формата А4 и меньше

49. Налоги: эволюция, определения и формы. Принципы налоговой политики и функции налогов

50. Новые принципы осуществления валютного регулирования и валютного контроля в РФ

51. Анализ проблем возмещения ущерба, причиненного незаконными действиями государственных органов

52. Принципы гражданского процессуального права

53. Либерализм и марксизм: сравнительный анализ

54. Личные (гражданские) (права и свободы в конституциях США и Испании /сравнительный анализ/)
55. Принципы и формы налогообложения на Украине
56. Сравнительный анализ конституции России и США

57. Сравнительный анализ социально-экономических прав, свобод и обязанностей в конституциях Китая и Испании

58. Федеральная резервная система и политика НацБанка РБ: сравнительный анализ

59. Сравнительный анализ Правительств Киргизской Республики и Российской Федерации

60. Историко-правовой анализ Закона СССР "о разграничении полномочий между СССР и субъектами федерации"

61. Принцип разделения властей в Конституции РФ 1993г.

62. Системы органов государственной власти субъектов Российской Федерации и штатов Индии (сравнительный анализ)

63. Способы формирования муниципальной собственности: правовое регулирование и сравнительный анализ

64. Анализ Закона РФ N1992-1 "О налоге на добавленную стоимость"

Портфель "Attache", A4, серый.
Одно отделение.
375 руб
Раздел: Папки-портфели, папки с наполнением
Пенал-книжка для начальной школы "Ever After High", 21x14 см.
Пенал-книжка для начальной школы. 1 отделение, держатели письменных принадлежностей. Застегивается на молнию. Размер: 21х14х3 см.
303 руб
Раздел: Без наполнения
Набор инструментов.
Помогаю папе - отличный игровой набор для юных мастеров. Научит начальным профессиональным навыкам. Поможет ребенку почувствовать себя
589 руб
Раздел: Инструменты и мастерские

65. Обзор и анализ проекта Налогового кодекса Российской Федерации

66. Анализ налоговой системы России. Некоторые аспекты

67. Принципы технического регулирования, порядок разработки, принятия технических регламентов

68. Понятие и принципы правового государства

69. Сравнительный анализ конструкции трудового договора Украины, России и стран с развитой рыночной экономикой

70. Общепризнанные принципы и нормы международного права как составная часть правовой системы России
71. Значение, цели, задачи и основные принципы трудового права
72. Анализ стихотворения John Donne

73. Грамматический анализ субстантивированных прилагательных и причастий

74. Tupolev 154M noise asesment (Анализ шумовых характеристик самолёта Ту-154М)

75. Сопоставительный анализ фразеологических единиц с компонентом “mund”/”рот” в немецком и русском языках

76. Лексико-семантический анализ современных англоязычных рекламных слоганов

77. Принципы работы редактора над статьями в энциклопедическом издании (на примере детских энциклопедий издательства "Дорлинг Киндерсли")

78. Анализ живописных произведений флорентийской школы конца XV - начала XVI веков

79. Метод действенного анализа в режиссуре театра, кино и телевидения

80. ТВ драматургия "Анализ книги Ю.М. Лотмана "Семиотика кино и проблемы киноэстетики"", "Проблема знаков"

Экологичный стиральный порошок Garden Kids, без отдушек с ионами серебра, 1350 грамм.
Благодаря входящим в состав компонентам на растительной основе средство мягко отстирывает и освежает детское белье и одежду из всех видов
399 руб
Раздел: Для стирки детских вещей
Штатив для создания снимков "сэлфи", зеленый.
Поднимите искусство "селфи" на новый уровень со штативом. Путешествуйте и фотографируйтесь на фоне живописных пейзажей. Находите
376 руб
Раздел: Держатели и подставки
Контейнер хозяйственный универсальный, на колесах, 10 литров.
Материал: пластик. Размер: 462х162х272 мм.
359 руб
Раздел: 5-10 литров

81. Древнегреческая и древнеримская культура - сравнительный анализ

82. Анализ новгородской иконы "Спас нерукотворный"

83. Анализ стихотворения А.С.Пушкина "Элегия"

84. Анализ авторской пунктуации в художественном тексте

85. Анализ романа "Преступление и наказание" Ф.М.Достоевского

86. Анализ новеллы "Измена" из произведения Бабеля "Конармия"
87. Анализ рассказа Блока "Потомки солнца"
88. Анализ стихотворения А. Блока "О доблестях, о подвигах, о славе"

89. Анализ стихотворения Блока "О доблестях, о подвигах, о славе..."

90. Анализ стихотворения Н.А. Заболоцкого "Завещание"

91. К анализу романа Булгакова "Мастер и Маргарита"

92. Принцип аналогии в морфологии

93. Сопоставительный анализ русских слов ошибка, заблуждение, ляпсус и французских faute, erreur, lapsus

94. Стилистический анализ стихотворения в прозе И.С. Тургенева "Собака"

95. Этимологический анализ слова "буржуазия"

96. Контент-анализ

Горшок дорожный и насадка на унитаз "HandyPotty" (лайм).
Дорожный горшок и насадка на унитаз HandyPotty помогут сделать путешествие еще комфортнее для малыша. Комбинированная модель сочетает в
1128 руб
Раздел: Сиденья
Пенал "Гонка", 19х11 см, 3 отделения.
Пенал предназначен для школьников 7-10 лет. Является важным помощником в учебе, ведь он решает задачу хранения ручек, карандашей и прочих
511 руб
Раздел: Без наполнения
Конструктор электронный "Знаток". 320 схем.
Набор электронных блоков и соединений, позволяющий конструировать электрические цепи без пайки. Описано 320 схем. Даже без помощи
2858 руб
Раздел: Инженерные, научно-технические

97. "Конармия". Анализ новеллы Бабеля "Мой первый гусь"

98. Анализ стихотворения А.А. Блока "О! Весна без конца и без краю!"

99. Чтение и анализ сказок

100. Анализ стихотворения Ахматовой "Родная земля"


Поиск Рефератов на сайте za4eti.ru Вы студент, и у Вас нет времени на выполнение письменных работ (рефератов, курсовых и дипломов)? Мы сможем Вам в этом помочь. Возможно, Вам подойдет что-то из ПЕРЕЧНЯ ПРЕДМЕТОВ И ДИСЦИПЛИН, ПО КОТОРЫМ ВЫПОЛНЯЮТСЯ РЕФЕРАТЫ, КУРСОВЫЕ И ДИПЛОМНЫЕ РАБОТЫ. 
Вы можете поискать нужную Вам работу в КОЛЛЕКЦИИ ГОТОВЫХ РЕФЕРАТОВ, КУРСОВЫХ И ДИПЛОМНЫХ РАБОТ, выполненных преподавателями московских ВУЗов за период более чем 10-летней работы. Эти работы Вы можете бесплатно СКАЧАТЬ.