|
|
|
сделать стартовой | добавить в избранное |
 |
|
Дослідження антивірусної активності 6-азацитидину та амізону в модельній системі: цитомегаловірус - культура клітин фібробластів легень ембріона людини |
Ночник-проектор "Звездное небо и планеты", фиолетовый. 
Гуашь "Классика", 12 цветов. 
Коврик для запекания, силиконовый "Пекарь". КИЇВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ ТАРАСА ШЕВЧЕНКО АБДУЛЛАЄВА МАЙЯ ВОЛОДИМИРІВНА УДК: 578.825.12:578.74:615.281 ДОСЛІДЖЕННЯ АНТИВІРУСНОЇ АКТИВНОСТІ 6-АЗАЦИТИДИНУ ТА АМІЗОНУ В МОДЕЛЬНІЙ СИСТЕМІ: ЦИТОМЕГАЛОВІРУС – КУЛЬТУРА КЛІТИН ФІБРОБЛАСТІВ ЛЕГЕНЬ ЕМБРІОНА ЛЮДИНИ 03.00.06 – вірусологія АВТОРЕФЕРАТ дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук Київ - 2008 Дисертацією є рукопис Робота виконана в Інституті епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України Науковий керівник: доктор медичних наук, професор, член-кореспондент НАН та АМН України, РАМН, заслужений діяч науки і техніки України Фролов Аркадій Федорович Інституту епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України, завідувач відділу загальної вірусології Офіційні опоненти: доктор біологічних наук, професор Руденко Адель Вікторівна Інститут урології АМН України, завідувач лабораторії мікробіології, вірусології та мікології кандидат біологічних наук, старший науковий співробітник Нестерова Надія Віталівна Інститут мікробіології і вірусології ім.Д.К. Заболотного НАН України, завідувач лабораторії репродукції вірусів Захист дисертації відбудеться “4” березня 2008 р. о 14 год. на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 26.001.14 при Київському національному університеті імені Тараса Шевченка за адресою: 03127, м. Київ, пр-т Глушкова 2, корпус 12, аудиторія 434. Поштова адреса: 01033, м. Київ, вул. Володимирська 64. З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Київського національного університету імені Тараса Шевченко за адресою: Україна, 01033, м. Київ, вул. Володимирська, 58. Автореферат розісланий “ 28” січня 2008 р. Вчений секретар спеціалізовано вченої ради О.В. Молчанець ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ Актуальність теми. Цитомегаловірусна інфекція (ЦМВІ) на сьогодні особливо актуальна проблема сучасності. За оцінюючими даними, рівень інфікування цитомегаловірусом, як у cвіті так і у нашій країні становить більше 90% ( ri cado D.E., 2000; Нисевич Л.Л., 2002 та інш.). Особливо важливе місце ЦМВІ належить у патології плоду, новонароджених і дітей раннього віку. Вона є однією із причин самовільних викиднів, передранніх пологів, вроджених вад розвитку, фетопатій. Небезпечною ЦМВІ є і для реципієнтів органів та кісткового мозку, онкологічних хворих та ВІЛ-інфікованих (Чешик С.Г., 2001). Широкий спектр клінічних проявів та розповсюдженість ЦМВ серед усіх верств населення, спонукає звернути увагу на своєчасну діагностику ЦМВІ, враховуючи яку, можливо у найкоротший термін скоректувати стратегію лікування для хворих. Найбільш розповсюджені методи виявлення ЦМВ імуноферментний та полімеразної ланцюгової реакції мають ряд недоліків, із яких найбільш значний полягає у складності диференційної діагностики первинної, персистентної чи реактивованої інфекції. Це обгрунтовує використання у світовій лабораторній практиці нових методів ранньої специфічної експрес діагностики ЦМВІ. Хіміотерапія ЦМВІ є складним і в багатьох випадках не вирішеним завданням. Існуючі хіміотерапевтичні засоби поки не дозволяють досягти повної зупинки продуктивної реплікації ЦМВ.
Основні препарати, які специфічно інгібують репродукцію ЦМВ (ганцикловір, валганцикловір, фоскарнет і цидофовір) мають побічні токсичні ефекти (Дзюблик И.В, 1999; DeSme M.D., 1999). А тривале застосування ганцикловіру у великих дозах викликає формування резистентності до ЦМВ (Me dez J.C, 1999). Крім того, довготривалі курси лікування до цього часу залишаються надзвичайно дорогими при сумнівному ефекті. Саме тому актуальним питанням дослідження ефективності методів лабораторної діагностики ЦМВІ, які дозволяють встановити форму інфекції та пошуку нових анти-ЦМВ засобів із вивченням механізмів їх дії і було присвячено дану дисертаційну роботу. Даний напрямок досліджень дасть можливість вдосконалити методи діагностики та лікування ЦМВІ. Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Роботу виконано у відповідності з напрямом наукових досліджень Інституту епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України, лабораторії загальної вірусології, у рамках тематичного плану “Вивчення механізмів епідемічного процесу при грипі та цитомегаловірусній інфекції”, завдань: “Цитогенетичні дослідження гострої та персистентної форми ЦМВ-інфекції”, та “Вивчення механізмів дії амізону та 6-аzaC на репродукцію ЦМВ i vi ro” у 2001-2004 роках (шифр: 084, номер держреєстрації 01.02.U 000631). Мета і задачі дослідження. Мета роботи — дослідження діагностичної цінності методів ранньої лабораторної діагностики ЦМВІ, а також вивчення анти-цитомегаловірусної активності 6-аzaC та амізону. Для досягнення поставленої в роботі мети передбачалось вирішення наступних задач: Встановити ефективність виявлення ранніх білків ЦМВ швидким культуральним методом та у тесті на виявлення антигенемії; Дослідити можливість диференціації персистентної та гострої форм ЦМВІ за допомогою експресних методів лабораторної діагностики (ШКМ, ІФА, ПЛР, тАГ); Вивчити цитотоксичну дію 6-azaC та амізону в культурі клітин фібробластів легень ембріона людини; Дослідити анти-ЦМВ активність 6-azaC та амізону у дослідах i vi ro; Визначити вплив 6-azaC та амізону на синтез ранніх (р72, рр65) та пізніх (gB) вірусних білків в інфікованих клітинах. Об’єкти дослідження – цитомегаловірус людини АD 169, лейкоцити та сироватки периферичної крові пацієнтів, антивірусні препарати, інфіковані та неінфіковані ЦМВ клітини культури ФЛЕЛ, моноклональні антитіла направлені до р 72, рр 65, gB білків ЦМВ. Предмет дослідження – імунні комплекси антиген-антитіло, репродукція ЦМВ, цитотоксичність та анти-ЦМВ активність 6-azaC та амізону. Методи дослідження – для виконання поставлених завдань використовували вірусологічні, молекулярно-біологічні та імунологічні методи, а також методи статистичної обробки результатів. Наукова новизна одержаних результатів. Показано високу діагностичну цінність швидкого культурального методу, який підтверджує у 65% новонароджених і дітей раннього віку і у 70% хворих після трансплантації нирки - гостру форму ЦМВІ. Показано, що за допомогою тесту на виявлення антигенемії за 3-4 год. можливо виявити ранні білки вірусу і встановити форму перебігу ЦМВІ.
Вперше встановлено анти-ЦМВ активність 6-аzaC та амізону i vi ro, що дає змогу розглядати їх, як перспективні проти-ЦМВ агенти. Доведено, що механізм дії цих засобів полягає в інгібіції ситезу пізнього структурного білку gB. Практичне значення одержаних результатів. Отримані дані експериментально доводять високу ефективність застосування швидкого культурального методу та тесту на виявлення антигенемії, що дозволяє віддиференціювати гостру і персистентну форми ЦМВІ. За результатами досліджень було створено проект: “Модифікація і застосування швидкого культурального методу, як нової технології діагностики цитомегаловірусної інфекції” за №76/4 від 29.10.04 р. у напрямі: “Діагностика і методи лікування найпоширеніших захворювань”. Результати можуть бути використані в розробці методичних рекомендацій по діагностиці ЦМВІ у новонароджених та дітей раннього віку, а також у хворих після трансплантації органів чи тканин. Виявлена і підтверджена в дослідах анти-ЦМВ активність 6-azaC і амізону обґрунтовує необхідність наступних етапів оцінки препаратів, які можуть бути використані для клінічного впровадження, як нові проти-ЦМВ засоби. Результати даних досліджень відображені в деклараційних патентах: на винахід - №69986 А “Інгібітор цитомегаловірусу людини 2-b-D- рибофуранозил –5- аміно-1,2,4 – триазин –3 (2Н)- ОН”, на корисну модель - №10889 “Застосування 4-( -бензил)амінокарбонілу –1-метилпіридинію йодиду як профілактичного інгібітора цитомегаловірусної інфекції людини”. Особистий внесок здобувача. Автором самостійно проаналізована наукова література по темі дисертації. Основний об’єм експериментальної роботи, обробка та аналіз отриманих результатів, формулювання висновків дисертаційної роботи виконана пошукачем особисто. Здобувачем самостійно проаналізовано одержаний експериментальний матеріал, який викладений автором у ряді статей у фахових виданнях та тезах доповідей на вітчизняних та міжнародних конференціях. Планування основних напрямків досліджень дисертаційної роботи, обговорення отриманих результатів та їх узагальнення здійснені під керівництвом д.мед.н, професора, чл.-кор. НАН та АМН України, РАМН, заслуженого діяча науки і техніки України Фролова Аркадія Федоровича. При проведенні даних досліджень автор використовувала моноклональні антитіла до білків ЦМВ, які були отримані раніше у відділі клітинної інженерії Науково дослідного інституту вірусології РАМН, с.н.с., к.б.н. Макаровою Н.Е. Значну частину досліджень виконано на базі лабораторії клітинної інженерії Науково дослідного інституту вірусології РАМН, Москва (д.б.н., проф. Кущ А.А., к.б.н. Федорова Н.Е.), лабораторії контролю якості імунобіологічних препаратів Інституту епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України (д.мед.н. Рибалко С.Л., к.б.н. Дядюн С.Т.). Автор засвідчує глибоку повагу та щиру вдячність за співпрацю, корисні поради та сприяння у виконанні роботи. Апробація результатів дисертації. Результати досліджень, які увійшли в дисертаційну роботу, доповідались і апробовані на семінарах відділу загальної вірусології Інституту епідеміології та інфекційних хвороб АМН України та відділу клітинної інженерії Науково дослідного інституту вірусології ім.
У другій половині XIX ст. мюнц-кабінети були створені при Одеському і Чернівецькому університетах. Активну участь у їх створенні та діяльності взяли В. Іконников, В. Антонович. В Одесі першими організаторами нумізматичних досліджень, власниками нумізматичних колекцій, авторами праць про античні монети в Україні були І. Бларамберг та І. Стемпковський, а з 1839 року нумізматичні дослідження велись під егідою Одеського товариства історії та старожитностей. 1859 року було ухвалено урядове розпорядження про відправлення всіх знайдених на території України скарбів у Санкт-Петербург на розгляд Імператорської Археографічної комісії. Надходження монетних знахідок до Київського мюнц-кабінету зменшилось, хоча повністю не припинилось, як цього бажало російське самодержавство. Проте окремі топографічні зведення знайдених монетних скарбів та окремих монет на території України зробили В. Антонович, М. Біляшів-ський, В. Данилевич, В. Шугаєвський. У 1872 — 1906 роках мюнц-кабінет Київського університету очолив В. Антонович — відомий учений, історик, археолог
4. Методи та етапи статистичного дослідження
5. Віруси та антивірусні програми і їх призначення
9. Дослідження ринку керамічної цегли та розробка маркетингової стратегії ТОВ "Євротон"
10. Загальне дослідження ринку дитячого харчування та конкретно дитячих соків
14. Аналіз результатів соціологічного дослідження "Освіта в житті молоді"
Кружка-хамелеон "Кран с монетками". 
Стол детский "Малыш". 
Соковарка ВЕ-08/1 "Webber", 8 л. 18. Статистичні індекси та їх значення в економічних дослідженнях
19. Маркетингове дослідження посередницьких операцій банку з векселями
21. Дослідження логічних елементів емітерно-зв’язаної логіки
25. Метеорологічні дослідження
27. Дослідження метеорологічних умов (мікроклімату) у виробничих приміщеннях
28. Дослідження динаміки вологості грунту під посівами люцерни
29. Методика гідрогеологічних досліджень
30. Кримiналiстичне дослідження людини за ознаками зовнішності (габітологія)
31. Правове регулювання створюваних в інноваційних проектах результатів досліджень і розробок
32. Метод лінгвістичної географії. Зіставний метод. Структурний метод у лінгвістичних дослідженнях
Матрас-кокон "Зевушка". 
Настольная игра "Битва полов", артикул 7747. 
Рамочка на 12 фотографий "Первый год" (белая). 33. Наступність і перспективність у вивченні частин мови в початкових класах (дослідження)
34. Теоретичні проблеми дослідження субстрату в європейському мовознавстві ХІХ–ХХ ст.
36. VHDL - технології дослідження цифрових пристроїв
41. Дослідження чисельних методів інтегрування
42. Історіографія досліджень голодомору
43. Медичні дослідження Герофіла
44. Дослідження вебер-амперних характеристик магнітних кіл постійного струму
47. Різноманіття й багатозначність підходів у дослідженні культури
48. Дослідження Шекспірівської комедійної творчості
Заварочный чайник "Mayer & Boch", 1,6 л. 
Шкатулка "Шиповник" (36x26x18 см). 
Френч-пресс, 1000 мл. 49. Кабінетні методи маркетингових досліджень
51. Маркетингове дослідження збуту коньячних виробів ТМ "Жан-Жак"
52. Маркетингове дослідження ЧП "Фенаф"
57. Організація маркетингових досліджень в туризмі
58. Товарознавчі аспекти дослідження ринку взуття
59. Дослідження асортименту пральних машин
61. Дослідження поведінки споживачів
62. Дослідження ринку автомобілів (2009-2010 рр.)
63. Дослідження антагоністичних властивостей сучасних пробіотиків
Рюкзак "Max Steel", 42x29x15 см. 
Поильник в комплекте с трубочкой "Малышарики", от 6 месяцев, 360 мл. 
Полотенце вафельное "Сластена полосатка", банное, пляжное, 100х150 см. 65. Методи психофізіологічних досліджень
66. Предмет і завдання гігієни, основні методи досліджень
67. Променеве дослідження травної системи
69. Хіміко-токсикологічне дослідження лікарського препарату "Тетлонг-250"
73. Методи дослідження затрат робочого часу
74. Інформаційне забеспечення наукових досліджень з документознавства
75. Методи тестування у дидактичних дослідженнях
76. Методологія науково-педагогічного дослідження
77. Особистість як предмет дослідження педагогіки і психології
78. Система моніторингових досліджень навчальних досягнень учнів на уроках фізики
79. Методи наукових і експериментальних досліджень
80. Дослідження сучасного стану статусу національних меншин в України
Подгузники-трусики "Pampers. Pants. Джамбо", Maxi (9-15 кг), 52 штуки. 
Бумага для принтера "Ballet Classic", формат А3, 500 листов. 
Зеркальце карманное "Бабочка", 8x7 см. 81. Дослідження надійності твердосплавних пластин для токарних різців з надтвердих матеріалів
82. Дослідження сервоприводу з урахуванням нелінійності
83. Метод дослідження протизносних властивостей мастильних матеріалів при радіальних коливаннях валу
84. Предмет дослідження соціальної психології
85. Дослідження групової згуртованості учнівських груп
89. Девіантна поведінка молоді як об’єкт соціологічного дослідження
90. Матеріали і методи дослідження
91. Підготовка і проведення конкретно-соціологічних досліджень
92. Програма соціологічного дослідження, спрямована на визначення свого майбутнього населенням України
93. Соціологічне дослідження на визначення ролі молоді у вирішенні екологічної проблеми країни
94. Соціологічні методи дослідження у педагогіці
95. Дослідження організації роботи митних органів України в сфері попередження скоєння митних злочинів
96. Вплив експериментальних досліджень Томсона на розвиток фізики
Чехлы для коляски с поворотными колесами Bambola, 4 штуки. 
Пенал школьный "Мышка", цвет малиновый. 
Сменная кассета "Барьер 4", универсальная, для всех типов фильтров "Барьер". 97. Дослідження однофазного трансформатора
98. Дослідження трифазної системи при з’єднанні споживачів трикутником
99. Джерела живлення. Дослідження основних параметрів
