Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
сделать стартовой добавить в избранное
Кефирный гриб на сайте www.za4et.net.ru

Медицина Медицина

Постановка реакции ПЦР

Мыло металлическое "Ликвидатор".
Мыло для рук «Ликвидатор» уничтожает стойкие и трудно выводимые запахи за счёт особой реакции металла с вызывающими их элементами.
197 руб
Раздел: Ванная
Гуашь "Классика", 12 цветов.
Гуашевые краски изготавливаются на основе натуральных компонентов и высококачестсвенных пигментов с добавлением консервантов, не
170 руб
Раздел: 7 и более цветов
Брелок LED "Лампочка" классическая.
Брелок работает в двух автоматических режимах и горит в разных цветовых гаммах. Материал: металл, акрил. Для работы нужны 3 батарейки
131 руб
Раздел: Металлические брелоки

Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Реферат на тему: Постановка реакции ПЦР Челябинск 2008 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Устройство, задачи и функции лаборатории иммунологического типирования тканей Выделение ДНК из венозной крови Проведение ПЦР Ход реакции Анализ ПЦР-амплифицированной ДНК Заключение ВВЕДЕНИЕ В начале 1970-х годов норвежскому ученому Къеллу Клеппе (Kjell Kleppe) из лаборатории нобелевского лауреата Хара Гобинды Хораны (Har Gobi d Khora a) пришла в голову мысль, что можно амплифицировать ДНК с помощью пары коротких одноцепочечных молекул ДНК - синтетических праймеров. Однако в то время эта идея осталась невостребованной. Полимеразная цепная реакция была вновь открыта в 1983 году Кери Маллисом (Kary Mullis). Его целью было создание метода, который бы позволил амплифицировать ДНК в ходе многократных последовательных удвоений исходной молекулы ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы. Через 7 лет после опубликования этой идеи, в 1993 г., Маллис получил за неё Нобелевскую премию. ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах. ПЦР дает возможность существенно ускорить и облегчить диагностику наследственных и вирусных заболеваний, используется для подбора гистосовместимого донора органов и тканей, регистрации всех потенциальных реципиентов, нуждающихся в тканевых и органных трансплантантах, проведения иммунологического контроля за приживлением пересаженных органов и тканей. Устройство, задачи и функции лаборатории иммунологического типирования тканей 1. Общие положения. 1.1. Лаборатория иммунологического типирования (ИТ) организуется в составе станции переливания крови. 1.2. Лаборатория ИТ осуществляет методическое руководство иммунологическим типированием тканей в лечебных учреждениях подконтрольных административной территории. 1.3. Лаборатория ИТ осуществляет связь с лечебно-профилактическими учреждениями зоны с целью подбора гистосовместимого донора органов и тканей, регистрации всех потенциальных реципиентов, нуждающихся в тканевых и органных трансплантантах, проведения иммунологического контроля за приживлением пересаженных органов и тканей. 2. Основные задачи лаборатории иммунологического типирования: организационно-методическое руководство за проведением тканевого типирования в лечебно-профилактических учреждениях административной зоны; организация сбора, исследование сывороток на наличие анти-HLA антител; исследование антигенного состава тканей больных с различными заболеваниями, доноров тканевых и органных трансплантатов. 3. Функции лаборатории иммунологического типирования: 3.1. Лаборатория обеспечивает всеми видами иммунологического исследования больных, находящихся в лечебно-профилактических учреждениях курируемого региона. 3.2. Лаборатория исследует антигенный состав тканей потенциальных доноров тканевых и органных трансплантатов и реципиентов, составляет картотеки типированных доноров и реципиентов, осуществляет поиск совместимых пар донор-реципиент. 3.3. Проводит прямые и обратные пробы на совместимость между сывороткой и форменными элементами крови донора и реципиента.

3.4. Проводит наблюдение иммунологическими методами за развитием посттрансфузионных реакций и приживлением тканевых и органных трансплантатов. 3.5. Участвует в составлении планов по повышению квалификации сотрудников лечебно-профилактических учреждений зоны по иммунологическому типированию тканей. 3.6. Организует разъяснительную работу в лечебно-профилактических учреждениях зоны по вопросам клинического значения иммунологических исследований. Выделение ДНК из венозной крови Перед выделением ДНК необходимо приготовить рабочий раствор солевого буфера. Для этого Содержимое флакона с 10-кратным Солевым буфером, 10 мл, перенести в мерный цилиндр, довести бидистиллированной водой до метки 100 мл и 96% этиловым спиртом довести до метки 300 мл и перемешать. Готовый рабочий раствор Солевого буфера следует хранить в герметично закрытой посуде при температуре 4˚С. Солевой буфер необходим для дальнейшей промывки осадка с ДНК. Выделение ДНК проводят в специализированном боксе для выделения. Необходимо соблюдать правила техники безопасности: - руки должны быть защищены одноразовыми перчатками, которые утилизируются после выделения; - дыхательные пути защищены одноразовой маской, которая также подлежит утилизации после использования; - лаборант во время выделения должен быть одет в специальный халат, шапочку и очки. Все манипуляции с исследуемым материалом проводят при соблюдении правил работы с вирусами III и IV группы. Постановку ПЦР осуществляют как минимум в 3 рабочих зонах: Зона 1 (ламинарный бокс, бокс с УФ-лампой): подготовка ПЦР-реагентов. Зона 2 (ламинарный бокс, бокс с УФ-лампой): подготовка проб и контролей, выделение ДНК, внесение проб в пробирки с ПЦР-реагентами, проведение амплификации. Зона 3: детекция амплифицированной ДНК. Пробы из зоны 3 запрещено переносить в зоны 1 и 2 во избежание контаминации ДНК-матрицей. Пипетки или наконечники должны иметь аэрозольный барьер. Перчатки и халаты необходимо менять при переходе из одной зоны в другую. Оборудование, необходимое для выделения ДНК: – ламинарный бокс или стерилизуемое УФ-излучением помещение; – одноразовая пластиковая посуда (стерильные пробирки типа &quo ;Эппендорф&quo ; объемом 1,5; 0,5; 0,2 мл); – автоматические пипетки объемом от 0,5 мкл до 1 мл; – сменные одноразовые наконечники с аэрозольными фильтрами; – центрифуга типа &quo ;Эппендорф&quo ; с охлаждением и скоростью не менее 10000 g; – встряхиватель (&quo ;Вортекс&quo ;); Выделение ДНК из венозной крови проводят в несколько этапов: В пробирку объёмом 1,5 мл внести 300 мкл исследуемой пробы, добавить 800 мкл Лизирующего реагента и перемешать содержимое пробирки переворачиванием (5-10 раз). Интенсивное встряхивание смеси не рекомендуется. Лизирующий реагент необходим для разрушения клеток крови и экстракции из них ДНК. Термостатировать пробирку со смесью 5-7 мин. При температуре 65˚С. Если выделение ДНК проводится из твёрдого сухого мелкоизмельчённого материала, то следует термостатировать 30-40 мин. После термостатирования центрифугировать пробирку со смесью 10 сек при 5000 об. в мин., в том случае, если смесь содержит несолюбилизированный клеточный дебрис или другой нерастворённый осадок.

Прозрачный супернатант целиком перенести в чистую пробирку. В пробирку с чистой смесью добавить 45 мкл суспензии сорбента ucleoS M. Перед использованием ucleoS M следует интенсивно перемешать до гомогенной суспензии на вортексе. ucleoS M необходим для того, чтобы на его частицах осела выделенная из клеток ДНК. Пробирку поместить на ротатор и перемешивать 10 мин (10-20 об/мин) для лучшего оседания выделенной ДНК на частицах кремния. Центрифугировать 10 сек при 5000 об. в мин. Осторожно, не задевая осадок, удалить супернатант с помощью водоструйного насоса. К осадку добавить 400 мкл Лизирующего реагента, тщательно перемешать на вортексе до полного гомогенного состояния. Если супендирование затруднено (при большой нагрузке ДНК) из-за слипания сорбента, то его необходимо вначале суспендировать наконечником пипетки, а затем на вортексе. Добавить в пробирку 1 мл рабочего раствора Солевого буфера и перемешать содержимое переворачиванием пробирки 5-10 раз. Центрифугировать 10 сек при 5000 об. в мин. Осторожно удалить супернатант, не задевая осадок, с помощью водоструйного насоса. Повторить промывку дважды Для этого необходимо добавлять по 1 мл Солевого буфера, перемешивать содержимое пробирки на вортексе, центрифугировать 10 сек. при 5000 об. в мин. и удалять прозрачный супернатант. Просушить осадок при температуре 65˚С в течение 3-4 мин. В эту же пробирку внести 300 мкл ЭкстраГена ЕТМ, который необходим для отделения промытой ДНК от частиц кремния. ЭкстраГен ЕТМ следует отбирать от общего объёма при постоянном перемешивании. Суспендировать содержимое пробирки на вортексе 5-10 сек до получения гомогенной суспензии, затем термостатировать 4-5 мин при 65˚С. Ещё раз суспендировать содержимое пробирки на вортексе перед центрифугированием. Центрифугировать 1 мин при 10000 об. в мин. Перенести супернатант с ДНК в чистую пробирку. ДНК хранить при температуре -20˚С. Проведение ПЦР Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (i vi ro). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. В отличие от амплификации ДНК в живых организмах (репликации), с помощью ПЦР амплифицируются относительно короткие участки ДНК. В обычном ПЦР-процессе длина копируемых ДНК-участков составляет не более 3000 пар оснований (3 kbp). С помощью смеси различных полимераз, с использованием добавок и при определённых условиях длина ПЦР-фрагмента может достигать 20-40 тысяч пар нуклеотидов. Это всё равно значительно меньше длины хромосомной ДНК эукариотической клетки. Например, геном человека состоит примерно из 3 млрд пар оснований. Компоненты реакции Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты: ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать. Два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента. Термостабильная ДНК-полимераза— фермент, который катализирует реакцию полимеризации ДНК. Полимераза для использования в ПЦР должна сохранять активность при высокой температуре длительное время, поэтому используют ферменты, выделенные из термофилов— hermus aqua icus ( aq-полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu-полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo-полимераза) и другие.

Надо]садочную жидкость отсасывают (или сливают) из всех пробирок в одну стерильную колбочку, прогревают при температуре 56`С в те]чение 30 мин, и в ней определяют число бледных трепонем в тем]ном поле зрения, просматривая 10 полей зрения. Ампулирование производят сразу или на 2-3-й день после приготовления антигена. На ампулах с антигеном обозначают серию антигена, дату его изго]товления и среднее число бледных трепонем в одном поле зрения. Перед каждой постановкой РИП необходимо определять количе]ство бледных трепонем в антигене. Рабочий антиген должен содер]жать 15-20 бледных трепонем в поле зрения. Антиген применяется в дозе 0,3 мл для каждой испытуемой сыворотки. Расчет необходимо]го количества антигена делается в день постановки реакции. Напри]мер, для исследования 50 сывороток крови нужно 0,3х55, что в результате дает 16,5 мл рабочего антигена (поскольку необходимо взять на 5 пробирок больше с учетом контролей и случайных по]терь). Комплемент растворяют согласно указанию на этикетке, вводят в дозе 0,05 мл в опыт

1. Проблемы постановки рук (теоретическое обоснование)

2. Постановка задачи линейного программирования и двойственная задача линейного программирования.

3. Постановка лабораторной работы по курсу волоконнооптические системы связи

4. Апории Зенона и первая теоретическая постановка проблемы бесконечности

5. Постановка маркетинга в АО "Вятский торговый дом"

6. Феномен межплеменного и межэтнического договора (постановка проблемы половецкого компонента в этногенезе саха и кыргызов)
7. Ромео и Джульетта в театральных постановках
8. Русские мемуары в историко-типологическом освещении: к постановке проблемы

9. Линейное программирование: постановка задач и графическое решение

10. Критерии постановки хирургических заболеваний

11. Искусство постановки

12. Метод массовой постановки певческого голоса

13. Постановка целей

14. «Высота планки» при постановке учебных целей как один из факторов успешности обучения

15. Вот где задача зарыта! Алгоритм постановки задач рекламной кампании

16. Виртуальная политика: постановка проблемы

Книга-сейф "Английский словарь", цвет: черный, 24 см.
Этот сейф-шкатулка - точная имитация книги. Будучи поставленным на книжную полку, он ловко затеряется среди настоящей литературы, сохранив
711 руб
Раздел: Копилки
Карандаши для левшей "EasyColors", 12 цветов.
Эти эргономичные цветные карандаши позволяют подготовить руку к письму и сформировать навык работы с пишущими инструментами. Специальные
1517 руб
Раздел: 7-12 цветов
Муфта для коляски Bambola (шерстяной мех + плащевка + кнопки), черная.
Муфта на ручку коляски очень легко одевается и защищает Ваши руки от холода. Ткань муфты водоотталкивающая, она утеплена мехом и небольшим
489 руб
Раздел: Муфты на ручку

17. Постановка бюджетирования

18. Анклавный язык в составе языкового союза (к постановке проблемы)

19. Способы постановки диагноза пр лечении птиц

20. К вопросу классифицирования прогнозно-поисковых задач по степени геологической корректности их постановки

21. Постановка, настройка и исследование абонентского программного обеспечения сети Internet

22. Четыре подхода к постановке системы стратегического планирования
23. Социальная монополия: к постановке проблемы
24. Постановка налогового учета на промышленном предприятии

25. Аудит постановки бухгалтерского учета и внутрибанковского контроля в банке

26. Постановка поисково-оценочного бурения на Иньвинской площади

27. Постановка и решение транспортной параметрической задачи

28. Постановка задачі оптимального стохастичного керування

29. Жанры поздравлений. К постановке проблемы

30. Выбор маркетинговой стратегии и постановка целей в маркетинге

31. Постановка и внедрение элементов системы оперативного контроллинга на предприятии

32. Система разработки и постановки продукции на производство

Сумка-транспортный чехол усиленная для колясок "Книжка".
Сумка чехол выполнена из прочной и легко чистящейся ткани оснащена двумя ручками для переноски. Размеры: 93x50x36 см.
907 руб
Раздел: Дождевики, чехлы для колясок
Магниты "Standart", 0,7 кг, 30 мм, темно-синие, 10 штук.
Диаметр: 30 мм. Сила: 0,7 кг. Материал: цельный ферритный магнит. Количество: 10 штук. Цвет: темно-синий.
318 руб
Раздел: Магниты канцелярские
Светильник с датчиком света и движения "Майти лайт".
К сожалению, не всегда при ремонте и проектировании можно предугадать, где Вам понадобится установка светильника. Светильник с датчиком
405 руб
Раздел: Ночники

33. Архитектура и общественная безопасность: постановка проблемы

34. Прогнозирование рисков и постановка бюджетирования на промышленном предприятии

35. Теоретическое значение антропологии

36. Значение сна и сновидений. Предупреждение нарушений сна

37. Кораллы. Разнообразие и значение

38. Роль и значение машиностроительного комплекса в структуре народного хозяйства России
39. Значение газа и перспективы развития газовой отрасли в Казахстане
40. Значение срока в Гражданском праве

41. Значение разделов Польского государства 1772, 1793, 1794 годов

42. Движение декабристов. Причины, характер движения. Судьба и значение движения

43. Соборное Уложение 1649 г. и его значение

44. Налоговый контроль, его сущность и значение

45. Налоговое регулирование: место и значение в рыночной экономике

46. Биржа: понятие и значение

47. Трудовой договор, его значение и особенности в современных экономических условиях

48. Значение института несостоятельности (банкротства)

Качели детские деревянные "Волна".
Качели можно использовать как на улице, так и в помещении. Нейлоновые веревки крепятся с помощью удобных колец и с легкостью выдерживают
313 руб
Раздел: Качели, кресла-качалки, шезлонги
Соковарка "Webber" ВЕ-06.
Дно состоит из трех слоев. Материал: нержавеющая сталь. Подходит под любую кухонную плиту. Кастрюля для воды: 20х11 см, объем 3,5
1970 руб
Раздел: Скороварки, пароварки, мантоварки
Настольная игра "Доббль: Цифры и формы" (Spot It! Numbers & Shapes).
Детская версия знаменитой игры Доббль. На её карточках изображены цифры и геометрические фигуры разных цветов. И как всегда: каждая карта
944 руб
Раздел: Внимание, память, логика

49. Пословицы, поговорки английского языка. Их значение, употребление и русские эквиваленты

50. Культура: особенности и значение, взгляды и понятия

51. Русское юродство как феномен культуры, его национальное значение

52. Культура, её значение в жизни человека и общества

53. Значение текста в художественном образе древнерусской рукописной книги конца XIV – начала XV века

54. Использование переносного значения слова для создания художественных тропов
55. Советско-финская война 1939-40г. Итоги и значения
56. Значение православного воспитания в государстве Киевская Русь

57. Концепция Л.Н. Гумилева "Этногенез и биосфера земли" и ее значение в развитии философии истории

58. Интерфейсные БИС, параллельный и последовательный в/в, сопроцессор в/в, наиболее известные БИС, Модемы, протоколы обменами данных

59. Значение логики

60. База данных - Бактериологическая испытательная лаборатория Боханского района

61. Содержание и значение математической символики

62. Моделирование значений случайных векторов

63. Значение "Канон" врачебной науки для развития медицины /Авицена/

64. История болезни (туберкулез)

Зеркальце карманное "Котик", 8x7 см.
Симпатичное карманное зеркало станет Вашим незаменимым помощником и с легкостью разместится даже в небольшой женской сумочке или кармане.
354 руб
Раздел: Зеркала, расчески, заколки
Коробка подарочная "Цветы и павлиньи перья".
Коробка подарочная. Материал: мелованный, ламинированный, негофрированный картон плотностью 1100 г/м2. Отделка: полноцветный декоративный
302 руб
Раздел: Коробки
Шар для принятия решений.
Волшебный шар для принятия решений, на русском языке. Принцип действия: для начала нужно понять, на какой вопрос вы хотите получить ответ.
448 руб
Раздел: Прочее

65. Характеристика и значение деловых игр в медицине

66. Лечение туберкулеза костей и суставов

67. Работа медицинского лаборанта в экспресс-лаборатории и отделении реанимации

68. Инфильтративный туберкулез легких S1-2,6 справа

69. Характеристика основных отраслей правовой статистики. Ее значение в практической работе правоохранительных органов (Контрольная)

70. Уголовный кодекс 1926 и его значение
71. Берегозащитные сооружения их значения, и модернизация в пределах г.Сочи
72. ПРИНЦИП ТОЛЕРАНТНОСТИ В АДЫГСКОЙ НАРОДНОЙ ПЕДАГОГИКЕ И ЕГО ЗНАЧЕНИЕ ПРИ ФОРМИРОВАНИИ ЛИЧНОСТИ РЕБЕНКА

73. Значение взаимоотношений в семье в развитии ребенка, его будущей жизни

74. Воображение: понятие и значение в жизни человека

75. Любовь и ее значение в жизни человека

76. Предмет и значение логики

77. Генератор числовой последовательности

78. Разработка специализированного цифрового узла, осуществляющего преобразование параллельного 8-разрядного входного слова в последовательную форму

79. Благословение Патриархом Иаковом своих сыновей и пророчески прообразовательное его значение

80. Влажность воздуха и её значение

Настольная игра "Много-Много", новая версия.
«Много-Много» — единственная в своём роде игра, в которой дети знакомятся с арифметической операцией умножения. С помощью специально
792 руб
Раздел: Математика, цифры, счет
Настольная игра "Живые картинки (Schau Mal)".
Рисунки на карточках настольной игры Живые картинки действительно оживают! Свет в окнах гаснет, щенок засыпает, рыбка выпрыгивает из
608 руб
Раздел: Внимание, память, логика
Подгузники Merries (S), 4-8 кг, 24 штуки.
Созданы специально для нежной кожи ребенка. У этих подгузников "дышащая" мягкая пористая вкладка, пропускающая в три раза больше
347 руб
Раздел: 6-10 кг

81. Социальное значение спорта

82. Значение принципа системности в познавательной деятельности. Гносеология и онтологические схемы науки

83. Методологическое значение сравнительного метода в зоологических исследованиях

84. Европейская реформация XVI в.: основные фигуры, религиозные доктрины и социально-политическое значение

85. Валютный клиринг: Мировой опыт и его значение для стран СНГ

86. Основные средства, их классификация, оценка, учет и выбытие основных средств. Документация ее роль и значение в бухучете (Контрольная)
87. Роль и значение отчета о движении денежных средств как составной части бухгалтерской отчетности.
88. Методы переоценки основных фондов. Значение переоценки

89. Значение экономического учения Карла Маркса

90. Количественный подход к анализу индивидуального спроса. Спрос и полезность. Закон убывающей предельной полезности, его значение

91. Формирование рыночной стратегии и ее значение в деятельности предприятия и организации

92. Сущность и экономическое значение лизинга

93. Организация работы испытательной лаборатории на примере Товарищества с ограниченной ответственностью «Научно-Технический Инженерный центр»»

94. Значение вексельного обращения

95. Сущность и значение денег. Структура денежной массы. Денежные агрегаты

96. Значение и роль туризма в физическом воспитании, виды простейших туристических соревнований

Подгузники "Солнце и Луна. Нежное прикосновение", размер: 2/S (3-6 кг), 70 штук.
Подгузники "Солнце и Луна. Нежное прикосновение" сделаны по японской технологии в сотрудничестве с японской корпорацией WATASHI
661 руб
Раздел: 0-5 кг
Машинка закаточная (улитка, полуавтомат) "Мещера-1".
Машинка идеальна для домашнего консервирования, она проста в использовании и надежна в работе. Конструкция машинки обеспечивает ее
419 руб
Раздел: Консервирование
Игра магнитная "Одевашки. Настя".
Это магнитная история про то, как одеть куклу Настю. Она простая, но при этом очень увлекательная и не вызовет сложности у ребенка старше
343 руб
Раздел: Бумажные куклы

97. Декларация о государственном суверенитете Украины и ее историческое значение

98. Модернизация в традиционных укладах. Опыт Италии и его значение для России

99. Значение и последствия войны 1812 года


Поиск Рефератов на сайте za4eti.ru Вы студент, и у Вас нет времени на выполнение письменных работ (рефератов, курсовых и дипломов)? Мы сможем Вам в этом помочь. Возможно, Вам подойдет что-то из ПЕРЕЧНЯ ПРЕДМЕТОВ И ДИСЦИПЛИН, ПО КОТОРЫМ ВЫПОЛНЯЮТСЯ РЕФЕРАТЫ, КУРСОВЫЕ И ДИПЛОМНЫЕ РАБОТЫ. 
Вы можете поискать нужную Вам работу в КОЛЛЕКЦИИ ГОТОВЫХ РЕФЕРАТОВ, КУРСОВЫХ И ДИПЛОМНЫХ РАБОТ, выполненных преподавателями московских ВУЗов за период более чем 10-летней работы. Эти работы Вы можете бесплатно СКАЧАТЬ.