|
|
|
сделать стартовой | добавить в избранное |
 |
|
Стафилококки. Выявление резистентности к метициллину и другим b-лактамным антибиотикам методом скрининга |
Пакеты с замком "Extra зиплок" (гриппер), комплект 100 штук (150x200 мм). 
Коврик для запекания, силиконовый "Пекарь". Кафедра клинической фармакологии и антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии Контактный адрес: Дехнич Андрей Владимирович 214019, Смоленск, а/я 5, Факс: (0812)61-12-94 a drei@microbiology.ruУДК 615.33.015.8.07 Выявление резистентности к метициллину и другим b-лактамным антибиотикам методом скринингаС момента появления в 70-х годах метициллинорезистентные стафилококки и прежде всего метициллинорезистентные штаммы S aphylococcus aureus (MRSA) являются одними из ведущих возбудителей нозокомиальных инфекций. Частота MRSA в структуре стафилококковых инфекций в последние годы резко возросла во всем мире, например, в США с 2% в 1975 г. до 35% в 1996 г. Резистентность стафилококков к оксациллину (метициллину) может быть обусловлена тремя основными механизмами: o продукцией дополнительного пенициллинсвязывающего белка (ПСБ) – ПСБ-2а (фермента, участвующего в синтезе клеточной стенки), кодируемого хромосомальным геном mecА – классическая, или истинная резистентность к метициллину (оксациллину); o инактивацию вследствие гиперпродукции бета лактамаз; o модификацию нормальных ПСБ.С клинической точки зрения, важно дифференцировать штаммы с классической (mecА-обусловленной) резистентностью от штаммов с двумя другими редковстречающимися механизмами резистентности, обусловливающими низкий или пограничный уровень устойчивости. Это связано с тем, что при инфекциях, вызванных штаммами с mecA-обусловленной резистентностью, терапия бета- лактамными антибиотиками (пенициллинами, цефалоспоринами, карбапенемами) будет неэффективна. Кроме того, эти штаммы часто бывают резистентны практически ко всем другим классам антибиотиков за исключением гликопептидов (ванкомицин, тейкопланин). Фенотипические характеристики, которые могут помочь дифференцировать три перечисленных механизма резистентности, изложены в таблице.ТИПЫ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К МЕТИЦИЛЛИНУ(ОКСАЦИЛЛИНУ) У СТАФИЛОКОККОВШтаммы с классическим типом резистентности могут в свою очередь быть гомо- или гетерогенными по типу экспрессии устойчивости. При гомогенном типе экспрессии практически все микробные клетки проявляют резистентность в стандартных i vi ro тестах, в то время как при гетерогенном типе только небольшая часть клеток проявляет резистентность фенотипически. Нередко только 1 из 10–100 млн клеток в популяции с наличием гена mecА экспрессирует резистентность, что обусловливает получение пограничных результатов при определении чувствительности к оксациллину (МПК – 2–8 мг/л). Резистентность, обусловленная гиперпродукцией b-лактамаз и мутацией нормальных ПСБ, также приводит к получению пограничных значений МПК. Однако резистентность к оксациллину, обусловленная гиперпродукцией b-лактамаз, легко отличается от классической резистентности по ее обратимости при использовании ингибиторов b-лактамаз. В отличие от штаммов с классической резистентностью гиперпродуценты b- лактамаз и штаммы с мутациями нормальных ПСБ обычно не имеют множественной резистентности к другим антибиотикам. Наличие классической резистентности наиболее легко определить методом скрининга, так как рост микробных клеток с неклассическими типами резистентности обычно ингибируются.
Для определения чувствительности используется оксациллин ввиду его более высокой стабильности при хранении по сравнению с метициллином.ПРИНЦИП Для идентификации резистентности к оксациллину (метициллину) у стафилококков необходимо соблюдение следующих условий: o добавление 4% aCl в агар с оксациллином (pH 7,2–7,4, так как при более низком pH увеличивается число ложноотрицательных результатов); o температура инкубации 35oС; o длительность инкубации 24 ч для S.aureus и 48 ч – для коагулазоотрицательных стафилококков; o стандартизированное число микроорганизмов.МИКРООРГАНИЗМ Чистая культура S aphylococcus spp., инкубированная в течение 18–24 ч на кровяном агаре.МАТЕРИАЛЫ 1. Агар Мюллера–Хинтон с добавлением 4% aCl (4 г на 100 мл среды) и 6 мг/л оксациллина (0,6 мг на 100 мл среды). Агар Мюллера–Хинтон хранится при температуре 2–8oС, готовится согласно прописи на этикетке, 4% aCl добавляется до автоклавирования. 2. Субстанция оксациллина с известной активностью предварительно растворяется в стерильной дистиллированной воде (расчет концентрации оксациллина проводят с учетом его активности) и добавляется в охлажденный на водяной бане до 48 –50oС агар Мюллера –Хинтон. Приготовленный агар разливается по чашкам с толщиной слоя 3–4 мм (на чашку диаметром 100 мм – 25 мл). Готовые чашки со средой хранятся в пластиковых пакетах при температуре 4 –8oС не более 5 сут. 3. Для контроля роста необходимо также приготовить чашки с агаром, содержащим 4% aCl, но без антибиотика. 4. Кровяной агар с чистой культурой стафилококка, инкубированной в течение 18 –24 ч. 5. Стерильный физиологический раствор. 6. Стандарт мутности 0,5 по Мак-Фарланду. 7. Стерильные тампоны или микропипетка (10 мкл). 8. Термостат с температурой инкубирования 35oС.КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВАИсследование проводят при обязательном контроле роста испытуемых культур на агаре Мюллера–Хинтон с 4% aCl без оксациллина (культуру наносят так же, как на агар с оксациллином). Контрольные штаммы: S.aureus A CC 38591 – резистентный; S.aureus A CC 29213 – чувствительный.ПОСТАНОВКА ТЕСТАПриготовление инокулюма. Бактериальную взвесь стафилококка готовят из нескольких колоний с одинаковой морфологией на стерильном физиологическом растворе (3 мл) и доводят до мутности 0,5 по Мак-Фарланду (1,5·108 КОЕ/мл).Инокуляция. Метод I (микропипеткой): 1. приготовить разведение 1:100 стандартного инокулюма 0,5 по Мак- Фарланду для получения бактериальной взвеси, содержащей 1,5·106 КОЕ/мл (например, добавить 0,1 мл стандартной суспензии к 9,9 мл стерильного физиологического раствора); 2. с помощью микропипетки нанести каплю (10 мкл) разведенной стандартной суспензии на поверхность агара с оксацил лином.Метод II (с помощью тампона ): 1. погрузить стерильный ватный тампон в пробирку со стандартизированной суспензией (0,5 по Мак-Фарланду), затем отжать избыток влаги о стенку пробирки; 2. коснуться тампоном поверхности агара с оксациллином.ИНКУБАЦИЯ. Штаммы S.aureus инкубируются при температуре 35oС в течение полных 24 ч, а коагулаза(–) стафилококков – в течение 48 ч. Примечание. Среда АГВ не может быть рекомендована для постановки теста в связи с высокой частотой ложноположительных результатов.У
ЧЕТ РЕЗУЛЬТАТАИнтерпретация: o появление видимого роста более 1 колонии на месте нанесения культуры означает устойчивость данного штамма к оксациллину (метициллину); o при отсутствии роста на месте нанесения культуры исследуемый штамм учитывается как чувствительный к метициллину (оксациллину). o при сомнительных результатах, а также для штаммов, выделенных у больных с клинически неэффективной терапией и у больных с серьезными инфекциями, необходимо провести развернутое исследование с определением МПК к оксациллину и гена mecA.Представление результата: o S.aureus или коагулаза(–) стафилококк (S.epidermidis), чувствительный к метициллину (оксациллину); o S.aureus или коагулаза(–) стафилококк (S.epidermidis), резистентный к метициллину (MRSA или MRSE).Метициллино (оксациллино) резистентные стафилококки должны расцениваться как резистентные ко всем b-лактамам – пенициллинам, цефалоспоринам, карбапенемам, комбинациям пенициллинов с ингибиторами b-лактамаз. Кроме того, среди метициллинорезистентных стафилококков очень часто наблюдается ассоциированная резистентность к другим антибиотикам – аминогликозидам, макролидам, хинолонам, тетрациклинам.ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА 1. Скрининг на агаре с оксациллином предназначен для фенотипического определения штаммов, имеющих ген mecA. Однако штаммы с другими типами резистентности иногда могут давать ложноположительный результат. 2. Метод скрининга для выявления резистентности к оксациллину (метициллину) менее надежен у коагулаза(–) стафилококков, чем у S.aureus. Примечание. Оксациллин в сравнении с метициллином менее стабилен к действию стафилококковых b-лактамаз, что может привести к получению большего числа ложноположительных результатов, чем при использовании метициллина. В то же время метициллин в сравнении с оксациллином значительно менее стабилен при хранении, что и ограничивает его применение.ВАНКОМИЦИНОРЕЗИСТЕНТНЫЙ S aphylococcus aureusО возможности появления ванкомицинорезистентных штаммов S.aureus стали задумываться около 10 лет назад после сообще ний о появлении резистентности к ванкомицину у энтерококков.Первое сообщение о выделении метициллинорезистентного S.aureus со сниженной чувствительностью к ванкомицину (МПК 8 мг/л) из клинического материала появилось в 1996 г.Несмотря на значение МПК к ванкомицину, соответствующее диапазону умеренной резистентности, данный штамм был зарегистрирован как VRSA (ванкомицинорезистентный S.aureus) ввиду клинической неэффективности ванкомицина. У этого штамма не было найдено ни одного из ранее известных механизмов резистентности к ванкомицину; отмечено только увеличение толщины клеточной стенки и концентрации пенициллин-связывающих белков 2 и 2а.Далее одно за другим последовали сообщения о выделении из клинического материала штаммов S.aureus с МПК к ванкомицину 8 мг/л, обозначенных как VISA (S.aureus со сниженной чувствительностью к ванкомицину).В результате углубленного исследования ванкомицинорезистентности у MRSA при скрининге более чем 2000 штаммов из различных стационаров было выявлено от 1 до 25%(!) штаммов с гетерогенной (индуцибельной) резистентностью к ванкомицину, экспрессирующих ее с частотой около 1 клетки на 1 млн.
Кроме того, возможно относительное снижение концентрации Hb в крови за счет увеличения объема циркулирующей плазмы, т е. разведения его в большем объеме. Истощение запасов железа в организме спортсмена приводит: а) к снижению уровня физической работоспособности за счет: Pэргометрических показателей, Pизменения газовых градиентов организма (кислорода и углекислоты), Pнакопления молочной кислоты; б) к перетренированности. Контроль Hb в циклических видах спорта необходимо осуществлять ежемесячно. Для выявления скрытого дефицита железа используются углубленные методы исследования. Коррекция должна начинаться сразу после выявления дефицита железа: 1) возмещение дефицита железа в крови и тканях препаратами; 2) восстановление метаболизма в эритроцитах и других клетках; 3) коррекция причин, лежащих в основе дефицита железа. Мероприятия проводятся до нормализации состояния спортсмена, полного восстановления как Hb (минимум 140 г/л), так и «железа запасов» (уровень ферритина) с помощью витаминизации и приема анаболических препаратов растительного происхождения, антиоксидантов
1. Физиологические механизмы формирования эмоций
2. Психологические механизмы формирования социальных стереотипов
3. Социально-психологические механизмы формирования личности преступника
4. Теоретические основы механизма формирования цен в условиях рыночной экономики
5. Основы механизма формирования цен в рыночной экономике
9. Механизмы формирования доходов работников в зависимости от роста эффективности производства
11. Механизм формирования доходной части местных бюджетов за счет налоговых поступлений
12. Государственная пошлина: механизм формирования и практика применения
13. Механизм формирования фазовой структуры эпоксидно-каучуковых систем
14. Цена в рыночной экономике: понятие, виды механизмы формирования
15. Мировое хозяйство: закономерности формирования, тенденции и проблемы развития
Карточная игра "Додо". 
Полотенце махровое "Нордтекс. Aquarelle", серия "Волна" (цвет: светло-зеленый), 70х140. 
Набор детской складной мебели "Азбука" КУ2П/9. 17. Формирование механизмов рыночной конкуренции
20. Механизм возникновения и патогенеза обморожений. Симптоматика и принципы лечения
26. Краткое описание происхождения птиц и описание некоторых птиц кайнозойской эры
27. Основные проблемы генетики и механизм воспроизводства жизни
28. Балтика(формирование климата, балтийский щит, горные породы)
29. Проблемы формирования промышленности европейского севера России
30. Развитие жизни на Земле в протейскую эру
31. Кредитная политика государства и механизм ее реализации в условиях рынка
32. Проблемы формирования доходной части бюджета Ханты-Мансийского Автономного Округа
Фоторамка на 10 фотографий Alparaisa С32-019 "Love", 69x35,5 см (белый). 
Кружка фарфоровая "FIFA 2018. Забивака. Россия", 480 мл. 
Асборн - карточки. 100 занимательных игр в путешествиях. 33. Экономическая сказка-реферат "НДС - вражья морда" или просто "Сказка про НДС"
34. Патентование избирательных программ в контексте формирования концептуального рынка
35. Формирование государственного строя США
36. Формирование ответственного правительства в Англии в XVIIIв.
37. Развитие России в условиях формирования рыночных отношений
43. Порядок формирования и использования средств Фонда социального страхования РФ
44. Законотворчество и механизм реализации законов
45. Феодальное государство (экономическая основа, сущность, механизм, функции и формы)
47. Формирование навыка говорения на иностранном языке и критерии его автоматизированности
48. Источники и этапы формирования японского традиционного искусства гэйдо
Простыня на резинке "Беж", 160x200 см. 
Конструктор металлический для уроков труда №3 в деревянной упаковке. 
Компактные развивающие игры в дорогу "Логозавры", арт. ВВ2099. 49. Формирование эстетической ценности массового сознания в сфере архитектуры
50. Несколько рефератов по культурологии
51. Антигитлеровская коалиция и проблема послевоенного устройства мира. ООН: цели и механизм действия
52. Реферат по научной монографии А.Н. Троицкого «Александр I и Наполеон» Москва, «Высшая школа»1994 г.
53. Формирование экономического развития Японии
57. Последние века Римской империи: истоки формирования западноевропейской средневековой цивилизации
58. Механизм когерентности обобщенного кольцевого гиперкуба с непосредственными связями
59. Формирование и использование информационных ресурсов
60. Лечение вестибулярных шванном: Общие параметры
61. Синдром раздраженного кишечника: этиология, патогенез, клиника, диагностика, принципы лечения
62. Эффективность лечения экзем у собак
Карандаши цветные "Triangle", 12 цветов. 
Корзина "Плетенка" с крышкой, 35х29х22,5 см (белая). 
Зонт на коляску Lorelli, цвет: зелёный. 65. Ученые, внесшие вклад в лечение и изучение сердечно сосудистой системы
66. Клиника Диагностика и Лечение Гиперпластических процессов эндометрии
67. Синдром длительного сдавления: клиника, диагностика, лечение на этапах эвакуации
69. Современное течение и лечение инфекционного эндокардита
73. Лечение кологенных запоров
74. Синдром "Дисфагия". Принципы диагностики и лечения. Организация сестринского процесса
76. Диагностика и консервативное лечение асимметрии таза у детей
77. Гепатит С. Строение вируса, профилактика, лечение, этиология, etc.
78. Открытые способы лечения перитонита
79. Физиологические механизмы психических процессов и состояний
80. Цинкодефицит: причины, признаки, лечение
Держатель для сумки "Jardin D'Ete" со стразами "Стихия колец". 
Кружка фарфоровая "FIFA 2018. Забивака. Франция", 480 мл. 
Фотобумага "Lomond" для струйной печати, А4, 120 г/м, 100 листов, односторонняя, матовая. 81. Диагностика и лечение сифилиса
82. Клиническая фармакология средств, применяемых для лечения гастродуоденальной патологии
83. Хирургическое лечение малых периферических опухолей легких
84. Мастит: этиалогия, патогенез, оперативное вмешательство и лечение
85. Вегето-сосудистая дистония: причины, симптомы и лечение
90. Биология раневого процесса: лечение ран
91. Экономические механизмы охраны природы
92. Понятие и сущность содержания образования. Источники и факторы его формирования
94. Формирование каллиграфических навыков младших школьников (состояние, проблемы и пути оптимизации)
95. Формирование грамматических навыков на начальном этапе обучения иностранному языку
96. Формирование интереса подростков к народной музыке через их участие в фольклорных ансамблях
Рюкзак для старших классов "Фантазия", 41x32x14 см. 
Мобиль на детскую кроватку "Music Bed Bell" (свет, звук). 
Швабра отжимная "Хозяюшка Мила", KF-08. 97. Воспитание как процесс целенаправленного формирования и развития личности
98. Формирование личности в младшем школьном возрасте
99. Малые фольклорные жанры как средство формирования правильного звукопроизношения
Совок большой. 
