Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
сделать стартовой добавить в избранное
Кефирный гриб на сайте www.za4et.net.ru

Биология Биология

Рост бактерии Basillus subtilis и биосинтез нуклеозида инозина на высоко-дейтерированной среде

Забавная пачка денег "100 долларов".
Купюры в пачке выглядят совсем как настоящие, к тому же и банковской лентой перехвачены... Но вглядитесь внимательней, и Вы увидите
60 руб
Раздел: Прочее
Мыло металлическое "Ликвидатор".
Мыло для рук «Ликвидатор» уничтожает стойкие и трудно выводимые запахи за счёт особой реакции металла с вызывающими их элементами.
197 руб
Раздел: Ванная
Коврик для запекания, силиконовый "Пекарь".
Коврик "Пекарь", сделанный из силикона, поможет Вам готовить вкусную и красивую выпечку. Благодаря материалу коврика, выпечка не
202 руб
Раздел: Коврики силиконовые для выпечки

@2006 г. О. В. МОСИНМосковская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, 117571. Изучена возможность биосинтетического получения дейтерий-меченного инозина путём выделения из культуральной жидкости штамма- продуцента Bacillus sub illis. Метод получения инозина основан на использовании в качестве источника ростовых факторов при культивировании штамма-продуцента гидролизатов дейтерированной биомассы факультативных метилотрофных бактерий Brevibac erium me hylicum, полученных со среды, содержащей 98 об.% 2Н2O и 2 об.% С2Н3О2Н. Приведены экспериментальные данные по росту штамма B. sub ilis и биосинтезу инозина на среде, приготовленной из 99,9 ат.% 2Н2О и гидролизатов биомассы метилотрофных бактерий. Анализ степени дейтерированности инозина был проведён с использованием масс-спектрометрии FAB. Полученные результаты свидетельствуют о высокой степени включения дейтерия в инозин (62,5 % атомов водорода в углеродном скелете молекулы замещены на дейтерий). Ключевые слова: Bacillus sub illis. - Тяжёлая вода. - Дейтерий-меченный инозин. - Масс-спектрометрия. ВВЕДЕНИЕ В настоящее время культивирование штаммов-продуцентов на тяжелой воде, открывает все новые возможности для получения широкого круга биологически активных соединений (БАС), в т.ч. нуклеозидов, меченных дейтерием . В связи с этим перспективны биотехнологические процессы, в которых для роста на тяжелой воде используют штаммы продуценты нужных БАС, устойчивые к присутствию максимальных концентраций 2Н2O. Основной трудностью при биосинтезе изотопно-меченных нуклеозидов является недостаток соответствующих ростовых субстратов. Начиная с первых экспериментов Катца с соавт. по адаптации и выращиванию клеток Chlorella на тяжелой были разработаны среды на основе экстрактов дейтерий-меченной биомассы микроводорослей как источников ростовых субстратов для культивирования других штаммов-продуцентов БАС . Однако метод получения высокодейтерированных субстратов, хорошо апробированный на микроводорослях в лабораторных условиях, все же не находит широкого практического применения вследствие ряда трудностей, связанных, в частности, с адаптацией и культивированием микроводорослей в тяжелой воде, аппаратурной громозкостью технологической схемы, использованием фотореакторов и т.п. Другими альтернативными источниками дейтерий-меченных соединений могут служить метилотрофные бактерии, интерес к которым все возрастает благодаря успешному развитию технологии химического синтеза метанола . Усваиваемость биомассы метилотрофов клетками эукариот составляет 85-99 % , а производительность метилотрофов, измеренная по уровню конверсии метилового спирта достигает 50% . Как было показано нами раннее, метилотрофные бактерии могут быть достаточно быстро и легко адаптированны к тяжелой воде . В связи с этим, практический интерес представляет разработка на основе гидролизатов биомассы метилотрофов меченных сред для культивирования различных штаммов-продуцентов БАС, в частности нуклеозидов. Целью данной работы было исследование принципиальной возможности использования гидролизатов биомассы метилотрофных бактерий для получения инозина, высокомеченного дейтерием.

УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА. В работе использовали безводные соли марки “х.ч.”(РФ), белково- витаминный концентрат дрожжей (Пензенский завод, РФ), 2Н2О (99,9% 2Н) и С2Н3О2Н (97,5 % 2Н), полученные из Российского научно-исследовательского центра “Изотоп” (Санкт-Петербург, РФ). Бактериальные штаммы. Объектом исследования служил мутантный штамм B. sub ilis, способный продуцировать и выделять инозин в культуральную жидкость при росте на среде, содержащей в качестве ростовых факторов сухую дрожжевую биомассу, полученную на углеводородах. Штамм был получен из коллекции культур ГКПМ Российского научно-исследовательского центра генетики и селекции промышленных микроорганизмов. B. sub illis был предварительно адаптирован к росту на тяжёлой воде путём рассева на среде, приготовленной на основе 99,9 ат. % 2Н2О и использован в качестве продуцента инозина при ферментации. Отобранный штамм проявлял высокую жизнеспособность и стабильность по признаку инозинообразования при многократном пассивировании на агаризованных (2%-ный агар) средах. Штамм поддерживали на агаризованной среде, содержащей 2Н2O. В качестве источника ростовых факторов при культивировании штамма-продуцента инозина использовали штамм факультативных метилотрофных бактерий B. me hylicum, полученный в работе . Сырую биомассу B. me hylicum, полученную в полностью дейтерированной среде dM9 автоклавировали в 0,5 н. растворе 2 HCl (в 2H2O) при 08 ати в течении 30 мин. Экстракцию липидов проводили смесью хлороформ-метанол (2:1) по методу Блайя и Дайера . Гидролиз белка проводили в 6 н. 2 HCl (в 2H2O) (24 ч, 110 0С) . Культивирование B. sub ilis. Для получения посевного материала использовали среду следующего состава (в % по весу): глюкоза 2; пептон 2; бакто-витаминный концентрат дрожжей 2; aCl 0,25. Культивирование B. sub ilis проводили на среде, приготовленной на основе 99,9 ат.% 2Н2О (dFM-среда), содержащей (в % по весу): глюкоза 12; автоклавированная биомасса метилотрофных бактерий B. me hylicum 2,5; H4 O3 3; MgSO4 2; мел 2. Среды стериллизовали при 0,8 ати. в течении 30-40 мин, рН доводили до 7,0-7,2 с помощью гидроокиси калия. Посевной материал выращивали в колбах Эрленмейера объемом 250 мл (с наполнением средой не более 20 мл) в условиях интенсивной аэрации при 30-320С. После суток посевной материал переносили в ферментационную среду в количестве 5-10 об.%. и культивировали в течении семи суток как при выращивании посевного материала. Выделение инозина. Клетки отделяли от культуральной жидкости на центрифуге Т-24 (Германия) (10 000 об/мин., 10 мин.). Супернатант концентрировали при 10 мм рт ст до объёма, в два раза меньше исходного. Белки удаляли, осаждая их метанолом при -40 С, осадок отделяли центрифугированием (10 000 об/мин, 10 мин). К супернатанту добавляли 1 г активированного угля и выдерживали реакционную смесь при -4 0С в течении суток. Десорбцию инозина проводили 50 %-ным раствором спирта в 25 %-ном растворе аммиака, десорбант лиофилизовали. Полученный продукт дважды промывали ацетоном, сушили при 500 С. Инозин перекристаллизовывали из метанола.

Тонкослойную хроматографию (ТСХ) инозина осуществляли на пластинках “Silufol UV- 254”(Чехо-Словакия) в системе: н-бутанол-уксусная кислота-вода, 2:1:1. Инозин идентифицировали по поглощению в УФ свете. Содержание инозина в культуральной жидкости определяли на приборе “Beckma DU-6” (США) в пробах культуральной жидкости, объемом 10 мкл при помощи стандартной калибровочной кривой (249 нм). Элюцию пятен проводили дистиллированной водой. Аминокислотный анализ белковых гидролизатов проводили на приборе “Bio ro ic LC 50001” (ФРГ), 230 x 3,2 мм, рабочее давление 50-60 атм, скорость подачи буфера 18,5 мл/ч, нингидрина 9,25 мл/ч. Уровни включения дейтерия в аминокислоты белка были исследованы методом масс-спектрометрии электронного удара на приборе “MB-80A” (Hi achi, Япониня) после модификации аминокислот в метиловые эфиры дансиламинокислот по методике, указанной в работе . Масс-спектры инозина получены на приборе “MB-80A” (Hi achi, Япония) на глицериновой матрице, при потенциале 5 кВ и ионном токе 0,6-0,8 мА. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Получение дейтерий-меченного инозина. Для получения дейтерий-меченного инозина использовали мутантный штамм B. sub illis (предварительно адаптированный к росту на среде, содержащей максимальные концентрации 2Н2O путём рассева), который вследствие нарушения метаболических путей регуляции биосинтеза пуриновых нуклеотидов продуцирует и выделяет до 20 г инозина на 1 л культуральной жидкости. Иcследуемый штамм проявлял максимальную продуктивность по признаку инозинообразования на богатых ферментационных средах, содержащих в качестве источника углерода и энергии глюкозу (10-12 % от веса), а в качестве источника ростовых факторов и дополнительного источника азота белково-витаминный концентрат (БВК) дрожжей. Ввиду высокой стоимости дейтерий-меченных субстратов, и их малой доступности, было необходимо найти наиболее подходящий природный источник, из которого их можно легко выделять. В качестве такового использовали факультативные метилотрофные бактериии B. me hylicum, которые весьма удобны для наработки высокодейтерированных БАС . Данный штамм метилотрофных бактерий, характеризовался устойчивым ростом и высокими выходами биомассы на среде, содержащей 98 об.% 2Н2О и 2 об.% С2Н3О2Н (см. диаграмму). Именно поэтому мы использовали гидролизаты его биомассы для культивирования штамма продуцента инозина. При разработке рецептуры питательной среды учитывалось, что метилотрофные бактерии при росте на метаноле способны синтезировать большое количество полноценных белков (до 50% веса сухого вещества) , а также некоторое количество полисахаридов (до 10%) , причем эта способность сохраняется при росте на средах, содержащих тяжелую воду и дейтеро-метанол. Поскольку продуцент инозина является полиауксотрофным штаммом, нуждающимся для роста в тирозине, гистидине и аденине, было необходимо получать их из гидролизатов биомассы метилотрофных бактерий. Для этого проводили два метода гидролиза биомассы: 1. автоклавирование биомассы метилотрофных бактерий в 0,5 н. растворе 2НCl (в 2Н2O) (30 мин, 08 ати).

Вторая группа: Республики Коми, Саха (Якутия) и Хакасия, Красноярский край, Иркутская, Кемеровская, Магаданская, Омская, Оренбургская, Томская и Тюменская области. Для данной группы характерны высокие показатели производства продукции на душу населения и меньший спад производства, что полностью обусловлено экспортной ориентацией сырьевых отраслей. Неустойчивость конъюнктуры внешнего рынка, высокая капиталоемкость отраслей специализации и острая потребность в инвестициях обуславливают нестабильность экономической ситуации в этих регионах. Для этих субъектов характерны высокий уровень безработицы, значительный разрыв в уровне доходов занятых в отраслях специализации и других секторах экономики. Перспективы экономического роста для данной группы регионов оцениваются менее высоко, чем для первой, а восстановление региональных хозяйственных комплексов требует активизации государственной региональной политики, направленной на решение проблем регионального монополизма, собственности на природные ресурсы и распределение доходов от их использования, а также экологических, инвестиционных, внешнеэкономических и социальных проблем. 6.1.3.3

1. Изучение биосинтеза аминокислот штаммом Вrevibacterium methylicum при росте на средах, содержащих тяжелую воду и дейтеро-метанол

2. Хлорофилл: его свойства и биосинтез

3. Рост и развитие

4. Влияние мяты на рост и развитие перца сладкого

5. Рост населения, проблема продовольствия

6. The US Economy after September 11th. Decline or Rapid Growth? (Экономика США после 11-ого сентября. Снижение или Быстрый Рост?)
7. Высокое Возрождение Италии XVI века
8. Старый Ростов

9. Вирусы и бактерии. Проблемы СПИДа

10. Роль витаминов в процессе роста и развития человека

11. Проблемы профессионально-психологической компетентности и профессионально-личностного роста

12. Электрооптические методы измерения высоких напряжений и больших токов

13. Основы самосовершенствования. Программа личностного роста

14. Применение высоких технологий в сельском хозяйстве

15. Высоко-молекулярные соединения

16. Задачи кадрового менеджмента на стадии формирования, интенсивного роста, стабилизации и спада в организации

Мягкая игрушка "Волк. Забивака", 24 см.
Этот обаятельный, улыбчивый символ Чемпионата мира по футболу ещё и сувенир в память о событии мирового масштаба на всю жизнь! Уже
1280 руб
Раздел: Игрушки, фигурки
Портмоне для CD/DVD "Brauberg", на 96 дисков.
Вмещает 96 CD/DVD дисков. Цвета - ассорти (синий, черный, красный, серый). Тканевая окантовка. Застежка - молния. Обложка - пластик. Цвет
487 руб
Раздел: Боксы, сумки для CD, DVD
Шахматы обиходные, деревянные с доской.
Шахматы - настольная логическая игра со специальными фигурами на 64-клеточной доске для двух соперников, сочетающая в себе
660 руб
Раздел: Шахматы

17. Технико-экономический анализ. Экономический рост и фискальная политика государства

18. Модель экономического роста

19. Экстенсивный экономический рост

20. Понятие экономического роста, его типы и факторы

21. Экономический рост и проблемы окружающей среды

22. Экономический рост
23. Факторы роста цен, их влияние на доход и реальное потребление граждан
24. Экономический рост и кадровый потенциал России

25. Факторы экономического роста

26. Высокий Нэйл-Арт

27. Искусство высокой классики (450 - 410 гг. до н.э.)

28. Восставший из небытия. Рассказ о Высоко-Петровском монастыре

29. Хрестоматия как высокое искусство

30. Чистый свет высокой нравственной идеи в русской литературе

31. “Высокое косноязычие” Осипа Мандельштама

32. Маркетинговое исследование рынка рукавов высокого давления

Комплект постельного белья семейный "Самойловский текстиль. Японский сад", с наволочками 50х70.
Постельное белье "Самойловский текстиль" – отличный подарок себе и близким. Качественное, удобное и красивое постельное белье
1969 руб
Раздел: Бязь
Стакан складной (110 мл).
Компактный складной стакан легко умещается в кармане. Благодаря карабину его можно повесить на ремень, либо подвесить с внешней стороны к
360 руб
Раздел: Наборы для пикника
Пенал школьный "Pixie Crew" с силиконовой панелью для картинок (фиолетовый, алфавит).
Повседневные вещи кажутся скучными и однотонными, а тебе хочется выглядеть стильно и быть не как все? "Pixie Crew" сделает твою
1096 руб
Раздел: Без наполнения

33. Весы для измерения космологического роста массы вещества

34. Синдром избыточного бактериального роста при неспецифическом язвенном колите

35. Девясил высокий

36. Заманиха высокая (эхинопанакс высокий)

37. Функциональная активность лейкоцитов в условиях воздействия на организм высокой и низкой температур

38. Нервные заболевания при духовном росте
39. Успешный «управляющий ростом»: какой он?
40. Прогнозирование экономического роста

41. Инвестирование в НИОКР как одно из составляющих качественного роста российской экономики

42. Стратегии роста для малых, средних и крупных фирм

43. Возмущенные вариации магнитного поля высоких широт: геоэкологические аспекты

44. Высокая стипендия лучше низкой зарплаты

45. Конспект урока по биологии - биосинтез белков

46. Малый бизнес: трудности роста

47. Зигзаги карьеры: что влияет на карьерный рост

48. Психология поддержания высокого уровня служебной дисциплины

Набор детской складной мебели "Первоклашка. Осень".
В комплект входит стол-парта и стул с мягким сиденьем, пенал. Металлический каркас. Столешница облицована пленкой с тематическими
1637 руб
Раздел: Наборы детской мебели
Счеты детские "Умный жираф".
Счеты - это не только первый математический прибор, но и увлекательная игра. Пусть ребенок отсчитает столько косточек на счетах, сколько у
377 руб
Раздел: Счетные наборы, веера
Шкатулка для рукоделия "Сундучок", 18x13x8 см, арт. 80863.
Такая шкатулка послужит оригинальным, а главное, практичным подарком, в котором замечательно сочетаются внешний вид и функциональность.
627 руб
Раздел: Шкатулки для рукоделия

49. Психология поддержания высокого уровня служебной дисциплины

50. Высокое искусство самообразования

51. HDTV - телевидение высокой четкости

52. Маркетинг - это устройство для роста

53. Усилительные каскады в области высоких частот

54. Краткая характеристика основных причин и условий, способствующих росту преступности в современный период
55. Влияние сократительных и релаксационных характеристик мышц на рост квалификации спортсменов
56. Направленность нагрузки в макроцикле подготовки гандболистов высокой квалификации

57. Возраст, росто-весовые показатели и мастерство гимнастов-юниоров

58. Подготовка велосипедистов-шоссеиников высокой квалификации в условиях элитного профессионального календаря соревнований

59. Концепция блоковой композиции в подготовке спортсменов высокого класса

60. Особенности структуры соревновательного периода и специальной подготовленности баскетболистов высокой квалификации

61. Влияние окружающей среды на экономический рост и промышленность

62. Проблема роста населения и нехватки ресурсов

63. Экономический рост: источники, типы, движущие силы

64. Привлекая работника высокой квалификации

Стираемая карта "Моя Россия".
Стирамая карта России «Моя Россия» - абсолютная новинка на рынке стираемых карт и наша гордость! Это карта максимально насыщена
921 руб
Раздел: Подарочные наборы
Гель "Meine Liebe" для стирки черных и темных тканей, 800 миллилитров.
Концентрированный гель "Meine Liebe" предназначен для эффективной и бережной стирки черных и темных тканей. Рекомендован для
315 руб
Раздел: Гели, концентраты
Контейнер "Клиер", 15 литров.
Контейнер "Клиер". Материал: пластик. Объем: 15 литров. Длина: 42 см. Ширина: 28 см. Высота: 20 см.
374 руб
Раздел: Штучно

65. Теория экономического роста

66. Теория экономического роста

67. Факторинг - готовое решение для роста продаж

68. Где взять деньги для экономического роста

69. Технико-экномический анализ. Экономический рост и фискальная политика государства

70. Неоклассическая модель роста Р. Солоу
71. Экономический рост. Сущность, типы и факторы
72. Инвестиции и экономический рост в переходной экономике

73. Факторы и резервы роста производительности труда

74. Экономический рост

75. Экономический рост

76. Экономический рост Южной Кореи

77. Анализ ситуации с занятостью в наукоградах, ЗАТО и регионах с высокой концентрацией предприятий

78. Экономический рост, источники и модели. Политика экономического роста

79. Явления слияний и поглощений в России и странах ЦВЕ - рост продолжается

80. Иностранные инвестиции в России как залог экономического роста

Мультиплеер "Мамонтенок".
Мультиплеер "Мамонтенок" в оригинальном дизайне! Нажимая на кнопочки, ребенок сможет послушать 20 популярных песенок из
314 руб
Раздел: Смартфоны, мультиплееры
Переносная люлька-кокон "Кошки на белом".
Люлька-переноска Фея "Кокон" - это комфортная переноска для малыша. Модель с жестким дном и съемным капюшоном защитит ребенка от
1127 руб
Раздел: Переноски
Шкатулка декоративная "Стиль", 21,5x15,5x13 см (малиновая).
Шкатулка декоративная для ювелирных украшений, с выдвижными ящичками. Размер: 21,5x15,5x13 см. Материал: комбинированный.
2260 руб
Раздел: Шкатулки для украшений

81. Кокурентоспособность на международном рынке один из важнейших факторов роста национальной экономики

82. Модели экономического роста

83. Проблемы экономического роста в России

84. Экономический рост

85. Экономический рост

86. Экономический рост
87. Экономический рост
88. Экономический рост России

89. От парадигмы индустриального роста к парадигме устойчивого развития: новая роль городов

90. Экономический рост, распределение доходов и политика государства

91. Важные элементы, необходимые для нормального роста растения и их содержание в различных удобрениях

92. Биосинтез ДНК

93. Литические взаимодействия сапротрофных бактерий и дрожжей в естественных экосистемах

94. Рост и развитие сорных растений в условиях техногенного загрязнения почвы

95. Где живут бактерии

96. Бактерии: места обитания, строение, процессы жизнедеятельности, значение

Подставка для украшений Jardin D'Ete "Сиреневые сны".
Подставка для ювелирных изделий не оставит равнодушной ни одну любительницу изысканных вещей. Сочетание оригинального дизайна и
940 руб
Раздел: Подставки для украшений
Дорожный горшок Potette Plus, сине-зеленый.
Уникальный дорожный горшок для детей от 15 месяцев, который может стать незаменимым помощником для родителей в дороге. Детский дорожный
1392 руб
Раздел: Прочие
Комплект детского постельного белья "Неон" (цвет: синий).
Постельное белье из бязи выполнено из высококачественного хлопка, что гарантирует крепкий и здоровый сон. Комплект не требует особого
1498 руб
Раздел: Детское, подростковое

97. Влияние скорости течения воды на рост колониальных гидроидов

98. Биосинтез антоцианов в зеленых и альбиносных листьях ячменя обыкновенного

99. Влияние экзогенных трех- и шестиуглеродных углеводов на биосинтез аскорби-новой кислоты в проростках ячменя


Поиск Рефератов на сайте za4eti.ru Вы студент, и у Вас нет времени на выполнение письменных работ (рефератов, курсовых и дипломов)? Мы сможем Вам в этом помочь. Возможно, Вам подойдет что-то из ПЕРЕЧНЯ ПРЕДМЕТОВ И ДИСЦИПЛИН, ПО КОТОРЫМ ВЫПОЛНЯЮТСЯ РЕФЕРАТЫ, КУРСОВЫЕ И ДИПЛОМНЫЕ РАБОТЫ. 
Вы можете поискать нужную Вам работу в КОЛЛЕКЦИИ ГОТОВЫХ РЕФЕРАТОВ, КУРСОВЫХ И ДИПЛОМНЫХ РАБОТ, выполненных преподавателями московских ВУЗов за период более чем 10-летней работы. Эти работы Вы можете бесплатно СКАЧАТЬ.