|
|
|
сделать стартовой | добавить в избранное |
 |
|
Исследование апоптотической активности лимфоцитов периферической крови in vitro при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме |
Ночник-проектор "Звездное небо и планеты", фиолетовый. 
Горшок торфяной для цветов. СИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА БИОФИЗИКИ (зав. кафедрой – д.м.н., профессор. аков) Допущена к защите« » 2001г. Дипломная работа ИССЛЕДОВАНИЕ АПОПТОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ I VI RO ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ МОНОНУКЛЕОЗЕ И МОНОНУКЛЕОЗОПОДОБНОМ СИНДРОМЕ Работа выполнена: кафедра патофизиологии СГМУ зав. - чл.- корр. РАМН, профессор В.В. Новицкий ЦНИЛ СГМУ лаборатория молекулярной биологии зав.- к.м.н. И.И. Иванчук Научные руководители: чл.-корр. РАМН, профессор В.В. Новицкий, к.м.н. О.И.Уразова Томск-2001 Оглавление Список Глава 1. Обзор Инфекционный мононуклеоз (краткие сведения) . .7 Картина крови при инфекционном мононуклеозе . .11 Апоптоз . 16 1.3.1. Апоптоз как форма гибели клетки .16 1.3.2. Морфологические и биохимические проявления апоптоза . 18 Распознавание апоптотирующей клетки макрофагом . .20 Гены, участвующие в апоптозе . .21 Необходимость изучения апоптоза .22 Заключение . 24 Глава 2. Материалы и методы .25 Глава 3. Результаты . .30 Глава 4. Обсуждения полученных результатов . .42 Выводы . . 53 Список литературы . .55 Список сокращений АМ - “атипичные мононуклеары” ВИЧ - вирус иммунодефицита человека ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота фДНК- фрагментированная дезоксирибонуклеиновая кислота EBV– вирус Эпштейна-Барр ИМ - инфекционный мононуклеоз КОЕ-ГМ – колониеобразующая единица грануломоноцитопоэза ОИЗ с МПС - острые инфекционные заболевания с мононуклеозоподобным синдромом РНК- рибонуклеиновая кислота мРНК- матричная рибонуклеиновая кислота СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка Введение Актуальность проблемы: В патогенезе вирусных инфекций чрезвычайно важную роль играет гибель клеток, реализующаяся в форме некроза или апоптоза. Некроз является результатом травматического повреждения клетки, приводящего к нарушению целостности клеточных мембран. Апоптоз, запрограммированная или “физиологическая” форма клеточной гибели, реализуется посредством заложенных в генотипе клетки механизмов самоуничтожения и морфологически характеризуется уменьшением размеров клетки, уплотнением и фрагментацией хроматина [Погорелов В.М., Козинец Г.И., 1995; Ярилин А.А., 1996; Маянский А.Н. и соавт., 1997; Утешев Д.Б. и соавт., 1998]. Инфекционный мононуклеоз (ИМ) – лимфопролиферативное заболевание, возбудителем которого является вирус Эпштейна-Барр (EBV), относящийся к семейству герпесвирусов . Уникальность EBV заключается в его способности не разрушать, а стимулировать пролиферацию зараженных им лимфоцитов путем изменения соотношения между ростовыми и апоптозными потенциями клеток . Известно более десятка вирусных генов, которые кодируют факторы, усиливающие апоптозный процесс. Имеются они и у герпесвирусов. Некоторые вирусы способны блокировать апоптозный ответ на собственную инфекцию. Это достигается с помощью двух механизмов – повышения экспресии антиапоптозных (рост-стимулирующих) генов клетки и инактивации эффекторных молекул апоптоза. К первому механизму можно отнести стимуляцию протоонкогена типа Вcl-2, которая наблюдается, в частности, при персистенции EBV в В-лимфоцитах .
Однако необходимо отметить, что несмотря на проведение достаточно большого количества исследований, посвященных изучению процессов клеточной гибели, сведения, касающиеся особенностей апоптоза клеток крови при действии EBV, в доступной литературе крайне немногочисленны и фрагментарны, что и послужило причиной настоящего исследования. Цель исследования: Установить особенности апоптотической активности лимфоцитов периферической крови при инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом. Задачи исследования: Охарактеризовать количественные показатели периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни; Провести оценку жизнеспособности лимфоцитов периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни; Оценить содержание фрагментированной ДНК в лимфоцитах периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни; Оценить содержание лимфоцитов периферической крови с морфологическими признаками апоптоза у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни; Установить особенности и оценить степень изменений апоптотической активности лимфоцитов при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме в зависимости от сроков исследования. Глава 1. Обзор литературы. 1.1. Инфекционный мононуклеоз. Инфекционный мононуклеоз (ИМ) представляет собой острое, обычно доброкачественное лимфопролиферативное заболевание, чаще всего встречающееся в детском юношеском возрасте (реже у взрослых), сопровождающееся иногда серьезными осложнениями, а в редких случаях даже приводящее к летальному исходу [Живица Л.В. и соавт.,1987; Дунаевский О.А., Постовит В.А.,1982]. Заболевание вызывается EBV, что впервые было показано He le и соавторами . Вирус EBV представляет собой В-лимфотропный вирус человека, относится к семейству Herpesviridae, подсемейства Gammaherpesviridae, рода Lymphocryp ovirus . Для него характерна сферическая форма и наличие 4 структурных компонентов: сердцевина, капсида, внутренние оболочки, внешние оболочки. Сердцевина содержит линейную двунитчатую вирусную ДНК, которая состоит из 80 генов. Размер вириона у основного возбудителя ИМ колеблется от 100 до 150 нм . В составе вирионов обнаружено более 30 гликопротеидов, которые находятся на поверхности и вызывают образование вируснейтрализующих антител . Вирус чувствителен к воздействию эфира, весьма специфичен в отношении роста: размножается в культурах лимфобластов опухоли Беркитта, крови больных ИМ, лейкемических клетках и в культуре клеток мозга здорового человека. . Устойчивость EBV во внешней среде низкая. Он быстро погибает при высыхании, высокой температуре, обработке всеми дезинфицирующими средствами .
EBV отличается от других вирусов семейства герпеса способностью вызывать не цитолиз, а размножение пораженных клеток – В-лимфоцитов. Вирус способен к длительной персистенции в них . Проникновение EBV в клетку хозяина является сложным многоступенчатым процессом и включает в себя прикрепление вирионов к клеточным рецепторам, эндоцитоз и слияние мембран вирионов и клетки. В результате этого капсид освобождается от белков внешней оболочки, а комплекс ДНК-белок вируса проникает в ядро . Вирионная ДНК выходит в нуклеоплазму и транскрибируется клеточной РНК-полимеразой, затем проходит процессинг мРНК, синтез кодируемых продуктов и частичный обратный транспорт их в ядро, репликация ДНК и формирование дочерних молекул . Образовавшиеся в ядрах клеток незрелые капсиды попадают в цитоплазму, где заканчивается формирование зрелых капсидов и внешней оболочки вируса с последующим транспортом к поверхности и выходом их из клетки . При проникновении в организм человека первоначально EBV поражает эпителиальные клетки носо- и ротоглотки, а затем инфицирует В-лимфоциты, участвующие в диссеминации возбудителя по организму . Эпителиальные клетки могут быть инфицированы EBV через EBV-специфичный С2- рецептор. При этом процессы деления, дифференцировки и созревания клеток эпителиального слоя протекают параллельно с процессом активного вирусного воспроизводства . Таким образом, как считают авторы, &quo ;эпителиальная EBV-инфекция&quo ; - играет решающую роль в воспроизводстве и пожизненной персистенции вируса в организме человека . По современным данным, EBV является возбудителем ИМ в 90% случаев заболевания. К гипердиагностике ИМ у детей могут привести острые инфекционные заболевания с мононуклеозоподобным синдромом (ОИЗ с МПС). Так МПС может наблюдаться при цитомегалии, иерсинеозе, токсоплазмозе и различных формах ангин (фоликулярная, лакунарная, некротическая). Считается, что во всех случаях EBV играет свою роль совместно с другими факторами, вызывающими иммуносупрессию. В этой связи, заслуживают внимание работы, касающиеся связи EBV и ВИЧ. EBV выявляется в ротовой полости у ВИЧ-инфицированных больных . Механизм взаимодействия EBV с ВИЧ не установлен, хотя известно, что оба вируса поражают одни и те же рецепторы лимфоидных клеток. Высказывается предположение о том, что EBV может блокировать проникновение ВИЧ в клетку . С другой стороны, имеются сообщения о том, что продукты деятельности EBV активируют экспрессию вируса СПИД . Определяющими проявлениями заболевания являются: клиническая картина (высокая температура, ангина, увеличение лимфоузлов, печени, селезенки), характерные гематологические изменения (увеличение общего количества мононуклеарных клеток и атипичных лимфоцитов) и положительная реакция на гетерофильные антитела [Bevi ck J. .B. e.a.,1993; Cozad J.,1996; Moss D.J. e.a.,1992]. Следует, однако, отметить, что ни один из указанных признаков не является специфичным для ИМ . Диагноз заболевания ставится по совокупности клиники и лабораторных данных. [Гаспарян М. О. 1972; Жибурт и соавт.,1996; i ov L.P. e.a.,1995,1996]. Инкубационный период длится от 2 до 30 дней, чаще 4-7 дней.
Необходим при этом расчет абсолютного количества розеткообразующих лимфоцитов в 1 мкл крови. Распространенным методом является также реак ция бласттрансформации лимфоцитов in vitro под влиянием фито гемагглютинина или в миксткультуре. Довольно точное представление о состоянии иммунологическои реактивности больных дает исследование показателей фагоцитоза с тест культурой стафилококка. Определяют следующие показатели: 1) фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ) периферической крови (в процентах активных лейкоцитов на 100 подсчитанных), 2) показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) процентное отношение числа дезинтегрированных микробов к общему числу фагоцитированных (на 100 фагоцитов), 3) фагоцитарное число (ФЧ) -- среднее число микробов, захваченных фагоцитом Снижение этих показателей при динамическом исследовании свидетельствует о снижении иммуноло гической защиты организма и указывает на необходимость ее стимуляции. ПОРОКИ РАЗВИТИЯ ТРАХЕИ Атрезия трахеи заключается в частичном или полном отсутствии трахеи. Ребенок с этим пороком развития погибает сразу после рождения
1. СВОЕОБРАЗИЕ ЯПОНСКОЙ КУЛЬТУРЫ
2. Викинги : жизнь, быт, культура, связь с русской нацией
3. История и культура народов Огненной Земли
4. Формирование советской культуры: основные направления
5. Культура эпохи средневековья
9. Правосознание и правовая культура
10. Искусство в жизни общества. Искусство и "массовая культура"
12. Искусство и культура в древности
13. Импрессионизм как явление в культуре
14. Символ и имидж в массовой культуре
15. Взаимосвязь культуры и цивилизации в философской концепции Освальда Шпенглера
Магнитный лабиринт "Совенок". 
Органайзер для планшета (2 кармана), 40х35 см. 
Вожжи (поводок детский) "Baby BUM" № 3 (с ручкой и подмышечными валиками). 18. Культура на Украине в 40-50-ые годы
19. Культура, её структура и функции
20. Культура майя
21. Культура эпохи возрождения
26. Культура средних веков. Эпоха возрождения
28. История культуры Древнего Востока (Египет. Месопотамия. Иран. Сирия. Финикия. Палестина)
29. Культура поведения, культура общения и туризм
30. "О культуре" по работе Н.А. Бердяева "Философия неравенства" (Windows)
31. Готическая культура Франции
32. Древнегреческая и древнеримская культура - сравнительный анализ
Мел круглый "White Peps", 100 штук, белый. 
Экспресс-скульптор "Эврика", малый. 
Защитная накидка на автокресло "Зверята". 33. Европейские фонды, поддерживающие культуру
34. Зарождение Европейской культуры. Миф и ритуал
35. История отечественной культуры (лекции)
36. Культура
37. Культура
43. Культура Западной Европы от Возрождения до Реформации
44. Культура как социальная реальность
45. Культура Китая
46. Культура поведения за столом. История и современность
48. Культура Руси
Машина "Ракетовоз АРК". 
Подушка с наполнителем "Лебяжий пух. Стандарт", 50x70 см. 
Конструктор-присоска "Sibelly. Животные", 54 элемента. 49. Культура Руси и древнего мира (Шпаргалка)
51. Культура эпохи возрождения
52. Культура эрохи просвещения
53. Место античности в мировой культуре
57. Проблема смерти в культуре Древнего Египта и её отражение в храмовой архитектуре и живописи
58. Пространство и время как факторы специфики культуры
59. Русская культура
60. Русская культура в начале XX века
61. Русская культура и общественная мысль в России /18 век/
62. Сексуальная символика в культуре
64. Человек, творчество, культура в философии Н.А.Бердяева
Тележка багажная ТБР-20, зелено-черная. 
Чехол-книжка универсальный для телефона, белый, 14x6,7 см. 
Шкатулка-фолиант "Рим", 17x11x5 см. 65. Учение Освальда Шпенглера о локальных культурах и их перерастании в цивилизации
66. Культура Японии
67. Культура Возрождения в Западной Европе
68. Преемственность языческой и христианской культур у восточных славян
69. Культура поведения курсанта в кинотеатре
73. Культура Эпохи Высокого Возрождения и ее представители как светочи мировой культуры
74. Нравственная и эстетическая культура
76. Искусство в контексте культуры
77. Семиотика цвета в восточной и западной культурах
79. Становление культуры России
80. Противоречия и катаклизмы ХХ века, и их воздействия на культуру
Доска гладильная НВ1 Валенсия. Принт чехла "Доброе утро", 46x123,5 см.. 
Бутылочка для кормления "Avent", 260 мл. 
Глобус детский зоогеографический, с подсветкой, 210 мм. 81. Культура в понимании Питирма Сорокина
82. Динамика восприятия прекрасного в западноевропейской культуре
83. Культура 19 века
84. Культура башкир
90. Фараон Эхнатон и его жена Нефертити, развитие искусства и культуры при их царствовании
91. История изучения проблемы культуры, предмет культурологии
93. Культура древних циилизаций
94. Хип-хоп культура и её влияние на молодежный сленг
95. КультУра
Таблетки для посудомоечной машины "Clean&Fresh", 5 in1 (mega). 
Ящик почтовый с замком, коричневый. 
Настольная игра "Запретный Остров. Приключения для смелых!". 98. Культура в жизнедеятельности человека
99. Культура эпохи Возрождения
Совок №5. 
